Методы основанные на осаждении яиц паразитов называют. Лабораторная диагностика гельминтозов
Исходный уровень знаний и навыков.
Учащийся должен знать:
1. Представителей трематод описторха, парагонима, фасциолу, дикроцелия.
2. Жизненные циклы, пути заражения трематод, клиническую картину болезни, сроки хранения фекалий
Учащийся должен уметь:
1. Определить яйца трематод по рисункам, таблицам.
2. Формировать меры профилактики.
3. Приготовить нативный мазок, большой мазок, мазок по Като, оценить свою работу, работать с микроскопом.
4. Определять яйца трематод в препаратах, соблюдать правила охраны труда, соблюдать правила сан.-эпид. режима.
Структура занятия:
Теоретическая часть:
Ø Микролекция.
Практическая часть:
Ø Приготовление нативного мазка, большого мазка, мазка по Като, оценка работы, микроскопия
Микролекция.
Сбор и доставка материала
Окончательный диагноз гельминтозов может быть установлен только с учетом результатов лабораторных исследований. Основным методом лабораторной диагностики гельминтозов является обнаружение яиц или личинок гельминтов в фекалиях, моче, крови и других биологических жидкостях при микроскопическом исследовании. Материалами для исследований служат испражнения, содержимое двенадцатиперстной кишки, кровь, мокрота, биопсированные ткани и другие материалы.
Сбор материала для исследования производят в чистую стеклянную или пластиковую посуду, которая сопровождается направлением с указанием ФИО обследуемого. При массовом обследовании допускается сбор фекалий в стаканчики из парафинированной бумаги, целлофановые пакеты.
Испражнения для анализов должны доставляться в лабораторию непозднее одних суток, а при подозрении на стронгилоидоз - немедленно после их выделения. При нарушении этого правила постановка диагноза в связи с разрушением яиц или личинок нередко становится трудной или невозможной.
Для выявления яиц и личинок некоторых видов гельминтов используют специальные методы: метод Бормана, перианальный соскоб, метод мазков-отпечатков с помощью липкой ленты, культивирование личинок на фильтровальной бумаге (метод Харада и Мори) и др.
Практическая часть:
Наиболее распространенным методом исследования фекалий на наличие в них яиц гельминтов являются методы нативного мазка, толстого мазка под целлофаном и большого мазка.
При изучении яиц гельминтов под микроскопом целесообразно сопоставлять видимое изображение с его характеристикой в определителе яиц гельминтов.
Метод нативного мазка
Оборудование:
предметные стекла;
широкая кювета;
карандаш;
50 %-ный водный раствор глицерина (смешивают равные части глицерина и дистиллированной воды);
сосуд с 0,5% -ным раствором полидеза;
микроскоп.
Ход работы
1. Разложить предметные стекла в кювете, пронумеровать предметные стекла.
2. Нанести пипеткой по 2 капли 50 %-ного водного раствора глицерина на расстоянии 4 см одна от другой на предметные стекла.
3. Взять палочкой кусочек фекалий, размером со спичечную головку (30-50 мг), внести его в каплю глицерина и растереть до равномерной суспензии.
4. На каждом стекле готовят по два нативных мазка, которые не должны сливаться между собой и не доходить до краев, чтобы не испачкать пальцы лаборанта. Для каждой пробы используют новые палочки.
5. Препараты, не накрывая покровными стеклами, исследовать под микроскопом (объектив 8х, окуляр 10-15х).
6. По окончании исследования погрузить препараты в сосуд с 0,5% -ным раствором полидеза.
Метод толстого мазка под целлофаном.
Метод предложен К. Като, М. Миуром в 1954 г. Мазок представляет собой слой неразбавленных фекалий на предметном стекле, спрессованный под листком тонкого гигроскопического целлофана, пропитанного глицерином.
Рис. Приготовление толстого мазка под целлофаном:
а - нативный мазок; б - придавливание резиновой пробкой комочка фекалий, покрытых целлофаном; в - толстый мазок под целлофаном (по Ю.А. Березанцеву и Е.Г.Автушенко, 1976)
Оборудование:
широкая кювета;
полоски целлофана 22x30 мм, обработанные смесью Като в течение 24 ч;
смесь Като (3 % -ный раствор малахитового зеленого -6 мл, 6 % -ный раствор фенола - 500 мл, глицерин - 500 мл, 3,5 мл смеси хватает на 100 полосок);
резиновые пробки крупные;
пинцет анатомический;
пластиковые палочки;
карандаш;
микроскоп.
Ход работы
1. Разложить в кювете предметные стекла, пронумеровать предметные стекла.
2. Набрать палочкой фекалии размером с полгорошины (50-60 мг) и поместить на предметное стекло в центр.
3. Достать из банки пинцетом целлофановую полоску, обработанную по Като, и наложить на пробу кала на предметном стекле.
4. Придавить целлофан резиновой пробкой, чтобы кал распределился равномерно, не вытекая за края полоски.
5. Оставить препарат до просветления на 60 мин и затем исследовать под микроскопом (объектив 8-40х, окуляр 10х).
6. По окончании исследования препарат опустить в сосуд с 0,5 %-ным раствором полидеза.
7. Убрать рабочее место, вымыть руки.
Метод большого мазка.
Метод был предложен Ю.А. Березанцевым и Е.Г. Автушенко в 1973 г. Суть метода основывается на применении бинокулярного микроскопа и нативного мазка на стекле 6x9 см, позволяющего одномоментно исследовать до 200-300 мг кала.
Оборудование:
предметные стекла 6x9 см и 7x10 см;
пластиковые палочки;
50 %-ный раствор глицерина (глицерин и дистиллированная вода в равных частях);
сосуд с 0,5 %-ным раствором полидеза;
микроскоп;
эмалированная кювета;
карандаш.
Ход работы
1. Разложить предметные стекла 7x10 см в кювете, пронумеровать предметные стекла.
2. Затем на каждое предметное стекло положить второе предметное стекло 6x9 см.
3. Нанести пипеткой на предметное стекло размером 6x9 см 15-20 капель 50 % -ного раствора глицерина.
4. Взять палочкой из разных мест кусочки кала величиной со среднюю горошину (200-300 мг) и опустить его в раствор 50 %-ного глицерина на предметном стекле.
5. Растереть палочкой кусочек кала в глицерине до равномерной суспензии, чтобы занимаемая им площадь составляла около 33-34 см 2 . Мазок не покрывать покровными стеклами.
6. Взять большое покровное стекло 7x10 см за края вместе с находящимся на нем большим мазком (чтобы не запачкать пальцы).
7. Исследовать большой мазок при увеличении 34х (объектив 2х, окуляр 17х) и 50х (объектив 4х, окуляр 12,5х). В сомнительных случаях исследования проводят на большом увеличении.
8. По окончании исследования препарат опустить в сосуд с 0,5 %-ным раствором полидеза.
9. Убрать рабочее место, вымыть руки.
При таком методе исследования определяются крупные яйца гельминтов (аскариды, власоглава, анкилостомид, острицы, лентеца широкого, тениид, фасциолы). Они выглядят несколько иначе, в связи с чем необходим некоторый опыт, чтобы их быстро обнаружить. Большие мазки можно применять для исследования на яйца шистосом и личинок угрицы кишечной. Большой мазок содержит в 6-10 раз больше исследуемого материала, чем нативный мазок. Во столько же раз выше его эффективность.
Похожая информация.
Отбор проб и их консервирование
Для исследования берут фекалии из разных мест порциями в количестве 50 г и в чистой стеклянной или пластмассовой посуде с плотной крышкой направляют в лабораторию. Исследованию подвергаются свежие фекалии (не более суточной давности), а в некоторых случаях (при исследовании на стронгилоидоз) сразу после дефекации. Предложен ряд консервантов фекалий, содержащих яйца гельминтов: 4-10% раствор формалина, который для предупреждения развития яиц анкилостомид необходимо подогреть до t° 50-60°; смесь 0,2% водного раствора азотнокислого натрия (1900 мл), раствора Люголя (5 г йода, 10 г йодистого калия, 250 мл воды), формалина (300 мл) и глицерина (25 мл), в к-рой яйца гельминтов сохраняются 6-8 мес.; смесь глицерина (5 мл), формалина (5 мл) и воды (100 мл); растворы 1-1,5% детергентов «Лотос», «Экстра», «Барф», «Тайд» и т. д. (в весовом соотношении фекалий и раствора детергента 1: 5); смесь мертиолата 1: 1000 (200 мл), формалина (25 мл), глицерина (5 мл), дистиллированной воды (250 мл) с добавлением 0,6 мл раствора Люголя (из расчета 1 г фекалий на 10 мл смеси).
Для диагностики гельминтозов применяются макро- и микрогельминтоскопические методы исследования фекалий.
Макрогельминтоскопические исследования
Метод отстаивания
Суточную порцию фекалий тщательно перемешивают с 5-10-кратным количеством воды, сливают в высокие стеклянные цилиндры (банки, ведра) и оставляют до полного осаждения взвешенных частиц. Верхний мутный слой осторожно сливают и доливают чистую воду доверху (повторяют несколько раз, пока вода над осадком не станет прозрачной). Слив верхний слой, переносят осадок в кювету или чашку Петри и просматривают его (на темном фоне) под лупой или невооруженным глазом.
Метод отсеивания
Перемешанные с водой фекалии помещают на верхнее сито прибора, состоящего из системы сит с отверстиями убывающего диаметра, прибор соединяют с водопроводной сетью и, открыв водопроводный кран, промывают, а вытекающую жидкость отводят в канализацию. Крупные гельминты остаются на верхнем сите, а более мелкие задерживаются на нижних. Сита переворачивают и, смыв содержимое в темные кюветы, просматривают невооруженным глазом или под лупой.
Микрогельминтоскопические исследования
Проводят с целью обнаружения яиц (гельминтоовоскопические методы - цветн. рис. 1) или личинок гельминтов (гельминтоларвоскопические методы).
Гельминтоовоскопические методы
Качественные методы без обогащения
Нативный мазок . Небольшое количество фекалий растирают на предметном стекле в капле 50% раствора глицерина или кипяченой воды. Крупные частицы осторожно удаляют, смесь покрывают покровным стеклом и исследуют под микроскопом (просматривают два мазка). Удобнее и проще готовить длинные мазки между двумя предметными стеклами. Нативный мазок применяют только в дополнение к методам обогащения, т. к. он недостаточно эффективен, особенно при слабых инвазиях.
Толстый мазок с целлофаном по Като (К. Kato, 1954) является весьма эффективным методом исследования. Кусочки гидрофильного целлофана (размером 4x2 см) замачивают на 24 часа в смеси глицерина (50 мл), 6% раствора фенола (500 мл) и 3% водного раствора (6 мл) зеленой малахитовой (последняя не обязательна). Ок. 100 мг фекалий размазывают на предметном стекле и, покрыв кусочком влажного целлофана, придавливают резиновой пробкой № 5. Препарат исследуют через 30-60 мин., когда он слегка подсохнет и просветлится, вследствие чего яйца гельминтов легко обнаружить под малым увеличением микроскопа.
Качественные методы с обогащением (методы всплывания и осаждения)
Первые основаны на применении насыщенных растворов различных хим. веществ, в которых яйца всплывают благодаря разнице удельного веса.
Метод Кофоида-Барбера (Ch.А. Kofoid, М. A. Barber) в модификации Фюллеборна (F. Fulleborn, 1920). Ок. 5 г фекалий в высокой и узкой баночке (объемом 100 мл) размешивают деревянной палочкой в 100 мл насыщенного раствора поваренной соли, уд. вес к-рого 1,18 (400 г соли растворяют при кипячении в 1 л воды). Всплывшие на поверхность крупные частицы быстро удаляют палочкой или кусочком бумаги. После отстаивания смеси в течение 45-90 мин. проволочной петлей (диам. 0,8-1 см) снимают всю поверхностную пленку, переносят ее на предметное стекло. При исследовании на яйца анкилостомид смесь отстаивают 10-15 мин. Можно снимать пленку непосредственно предметным стеклом, к-рым покрывают баночку так, чтобы оно соприкасалось с жидкостью (насыщенный раствор соли доливают до краев баночки). После отстаивания предметное стекло снимают, быстро переворачивают и исследуют под микроскопом (без покровного стекла) приставшую к нему пленку с яйцами гельминтов. Этот метод хорошо выявляет яйца всех нематод и карликового цепня. Тяжелые яйца трематод; большинства цестод и неоплодотворенных аскарид всплывают плохо, поэтому исследуют и осадок. Для этого после снятия пленки жидкость из баночки быстро сливают и из осадка петлей или пипеткой берут несколько капель, переносят их на предметное стекло, добавляют каплю глицерина для просветления и исследуют под микроскопом.
Метод Е. В. Калантарян (1938) Является более эффективной модификацией метода Фюллеборна. В нем раствор поваренной соли заменен насыщенным раствором азотнокислого натрия, уд. вес к-рого 1,39 (один объем азотнокислого натрия растворяют в равном объеме воды при кипячении), пленку снимают через 20-30 мин.
Применяются также методы Фауста (Е. С. Faust, 1939), Брудастова с соавт. (1970) и др.
Для осаждения яиц гельминтов используют хим. вещества, растворяющие жиры и белки фекалий.
Метод Телеманна (W. Telemann, 1908) в модификации Миягавы (Y. Miyagawa, 1913) . Ок. 5 г фекалий растирают в ступке или баночке, добавив по 5 мл этилового эфира и 50% раствора соляной к-ты; смесь процеживают через проволочное или волосяное сито в пробирку и центрифугируют. В пробирке образуется 3 слоя: вверху - эфир с растворенным жиром, ниже - соляная к-та с растворенными белковыми веществами, в осадке - нерастворимые части фекалий и яйца гельминтов. Верхние слои сливают, а к осадку добавляют воду и центрифугируют. Несколько капель осадка переносят на предметное стекло и исследуют под микроскопом. Этим методом можно обнаружить яйца всех видов гельминтов, но они иногда деформируются.
Метод Ритчи (L. S. Kitchie, 1948). Для растворения жиров и белков используют формалин и эфир.
Для осаждения яиц гельминтов можно применять различные детергенты. За рубежом получил распространение метод фильтрации в специальных аппаратах Белла, который применяется для исследований не только фекалий, но и мочи, крови и т. д.
Существует ряд методов, сочетающих принципы флотации и осаждения яиц. К их числу относятся методы Лейна (С. A. Lane), Риваса (D. Rivas), Горкиной, Дарлинга (S. Т. Darling). Один из таких флотационно-седиментационных методов, а также метод последовательных сливов предложены Н. В. Демидовым (1963, 1965) для исследования на фасциолез и дикроцелиоз.
Количественные методы
Метод Столла (N. R. Stoll, 1926). В градуированную широкую пробирку или колбочку (с двумя метками: 56 и 60 мл) наливают до первой метки децинормальный раствор едкого натра, добавляют фекалии до тех пор, пока уровень жидкости не достигнет второй метки, тщательно перемешивают стеклянной палочкой и, поместив 10 стеклянных бусинок или мелких камешков, закрывают пробкой и встряхивают в течение 1 мин. Быстро, чтобы взвесь не отстоялась, набирают градуированной пипеткой 0,075 мл смеси (0,005 г фекалий), переносят на предметное стекло с нанесенной на нем сеткой, покрывают покровным стеклом и подсчитывают под микроскопом яйца гельминтов в препарате; умножив полученное число на 200, получают количество яиц в 1 г фекалий. Для более точного результата подсчитывают яйца в двух или более препаратах и берут средний показатель. Метод Столла нечувствителен при слабых инвазиях. Поэтому рекомендуют подсчитывать число яиц в препаратах, приготовленных различными методами флотации или осаждения, при условии постоянного использования равной навески фекалий и посуды одного объема. Используют также толстый мазок по Като.
Метод Бивера (Р. С. Beaver, 1950). Готовят стандартный мазок, густоту к-рого определяют при помощи электрофотометра, а затем подсчитывают в нем все яйца гельминтов.
Гельминтоларвоскопические методы
Метод Берманна (G. Baermann, 1917). 5-10 г свежевыделенных фекалий помещают на металлической сетке в стеклянную воронку, на узком конце к-рой надета резиновая трубка с зажимом. Во избежание загрязнения осадка частицами кала рекомендуется подкладывать (на сетку) бумагу или добавлять в фекалии животный уголь или кукурузную муку. Воронку наполняют теплой водой (t° 45-50°) до соприкосновения с фекалиями. В силу термотропности личинки активно перемещаются в теплую воду и постепенно скапливаются в нижней части воронки, над зажимом. Через 3-4 часа зажим открывают, жидкость спускают в 1-2 пробирки, центрифугируют в течение 2-3 мин., верхний слой сливают, а осадок исследуют на предметном стекле под микроскопом.
Метод выявления мирацидиев шистосом. Фекалии промывают в темноте при t° 8-10°, осадок выдерживают 45 мин. на ярком свете при t° 28°, затем переливают в темную колбу с трубочкой сбоку. Мирацидии концентрируются в прозрачной боковой трубке, откуда их можно выбрать.
Для выявления личинок анкилостом применяют также методы Фюллеборна и др.
Методы исследования других выделений, а также тканей и органов
Ок. 100 мл исследуемой мочи отстаивают 30 мин. в цилиндре и, удалив верхний слой, сливают 10- 15 мл осадка в пробирку, центрифугируют при 1500 об I мин в течение 1-2 мин.; осадок исследуют. Желательно собирать всю суточную порцию мочи.
Моче-половой шистосоматоз диагностируют путем выявления мирацидиев. Порцию свежей мочи центрифугируют в течение 5 мин., осадок переливают в окрашенную в черный цвет колбу, к верхней части к-рой припаяна прозрачная стеклянная трубочка. Добавляют воду в соотношении 1:5, 1: 10 и ставят на 2 часа в термостат при t° 25-30°. Вышедшие из яиц мирацидии видны через прозрачную трубочку невооруженным глазом в виде быстро движущихся точек. При хрон, форме шистосоматоза у больных к концу мочеиспускания выделяется кровь, но яйца в моче находят редко, поэтому рекомендуется прибегать к биопсии мочевого пузыря.
Исследование мокроты. В мокроте могут находиться яйца парагонимусов, шистосом, томинксов, личинки мигрирующих нематод, фрагменты эхинококкового пузыря. Всю доставленную порцию мокроты тщательно просматривают невооруженным глазом или под лупой, выбирают и исследуют все видимые обрывки тканей, скопления ржавого цвета и пр.; затем просматривают всю порцию мазками. Гнойную мокроту заливают равным количеством 0,5% раствора едкой щелочи, центрифугируют и исследуют осадок.
При некоторых гельминтозах в мокроте наблюдаются характерные изменения. При парагонимозе, напр., в мокроте можно обнаружить скопления яиц в виде желтоватых комочков, а также большое количество слизи, лейкоциты, эритроциты, альвеолярные клетки, спирали Куршманна, эластические волокна, кристаллы Шарко-Лейдена. Выявлены также характерные ромбовидные кристаллы с заостренными концами. Наличие большого числа эозинофилов позволяет дифференцировать парагонимоз от туберкулеза.
Исследование содержимого абсцессов и пунктатов . В гнойных выделениях абсцессов, а также в опухолях и кистах, удаленных при оперативном вмешательстве, можно обнаружить гельминтов, их фрагменты, личинки и яйца (эхинококк, альвеококк, спарганум, цистицерк, дирофилярия, аскариды, токсокара, парагонимус и др.). Техника исследования обычная; в некоторых случаях из тканей опухоли готовят гистологические срезы. Гнойное содержимое можно обработать методом Телеманна; прозрачную жидкость исследуют также, как и дуоденальное содержимое, добавляя серный эфир. Эхинококковую жидкость центрифугируют и исследуют осадок на наличие сколексов и крючьев; препараты окрашивают карболфуксином по Цилю-Нельсену.
Исследование крови. В крови обнаруживают микрофилярий и личинок мигрирующих нематод. Каплю крови берут из пальца или из мочки уха и исследуют в свежем виде или готовят из нее препараты.
Каплю крови помещают на предметное стекло с нанесенным квадратом из вазелина и слегка прижимают покровным стеклом. Под микроскопом видны микрофилярии, двигающиеся между клетками крови. Кровь можно помещать между двумя слоями клейкой целлюлозной ленты; микрофилярии сохраняют подвижность в течение 6 час.; в полностью высохшем препарате их можно различить под микроскопом в течение 30 дней. Идентифицировать виды микрофилярий можно лишь в окрашенных мазках или толстых каплях. Приготовленные препараты высушивают, гемолизируют и окрашивают по Романовскому - Гимзе, Райту, Цилю-Нельсену, Лейшману, Папаниколау (см. Райта метод окраски, Романовского-Гимзы метод, Циля-Нельсена метод). Обнаружив микрофилярий в капле крови, окрашенной по Романовскому-Гимзе, препарат дополнительно окрашивают гематоксилином Хансена; через 15-60 мин. промывают 2 мин. в проточной воде. Перекрашенный препарат дифференцируют в 0,2% растворе соляной к-ты; чехлик микрофилярий окрашивается в бледнофиолетовый цвет, а ядерная субстанция тела - в темно-фиолетовый.
При слабых инвазиях необходимо исследовать 2-10 лед крови с анти-коагулянтом (напр., с 5% раствором лимоннокислого натрия) одним из следующих методов.
Метод Кнотта (J. Knott, 1939), модифицированный Маркеллом и Фоге (Е. К. Markell, М. Voge, 1965). 2 мл крови перемешивают в центрифужной пробирке с 10 дел 1% уксусной к-ты, центрифугируют в течение 2 мин. при 1500 об/мин; поверхностный слой сливают, осадок распределяют на нескольких предметных стеклах и исследуют под микроскопом. Препараты можно окрашивать по Романовскому-Гимзе или другими методами.
Метод фильтрации Белла (D. R. Bell, 1967). В аппарате, состоящем из воронки из нержавеющей стали с прямоугольным отверстием и мембранных фильтров той же формы, размером 19 х 42 мм, с величиной пор от 0,8 до 5 мкм, фильтруют в пробирки кровь, гемолизированную в смеси из 1 мл детергента типола и 9 мл физиол, раствора (для ускорения фильтрации аппарат соединен с вакуумным насосом). Фильтр фиксируют в кипящей дистиллированной воде и окрашивают по Романовскому-Гимзе или горячим гематоксилином Эрлиха. Окрашенный фильтр высушивают в эксикаторе или в изопропиловом спирте (последовательно в 3 чашках), просветляют на стекле иммерсионным маслом и исследуют под покровным стеклом. Окрашенные препараты сохраняются несколько недель. Метод Белла наиболее эффективен для количественного учета микрофилярий в крови.
Применяется также метод с поливидоном Голдсмида.
Исследование кожи. В коже можно обнаружить микрофилярий онхо-церков и личинок гельминтов животных, вызывающих кожную форму larva migrans (см.). Срезы кожи или материал, полученный скарификацией, берут в области бедра, икры, ягодицы или на уровне дельтовидной мышцы. Конусообразный кусочек эпидермиса поднимают энтомологической булавкой и, срезав бритвой, исследуют на стекле в капле физиол, раствора. При отрицательном результате свежий препарат повторно просматривают через 10 мин.; личинки обычно локализуются по краям препарата. Полученный материал можно выдерживать в 2 мл физиол, раствора в течение 1-2 час. и исследовать осадок. Рекомендуют брать у больного 5 срезов кожи.
Можно готовить препараты и из крови и тканевой жидкости, выделившихся после сильного сжатия срезов. Капли окрашивают по Майеру, Романовскому-Гимзе или гематоксилином Делафильда.
Стандартный метод количественного учета инвазии. Биопсированный участок кожи диам. 3-5 мм и весом не менее 1-4 мг взвесить, разрезать на мелкие кусочки и подсчитать личинки под микроскопом в физиол. растворе на предметном стекле; 1-4 личинки в поле зрения обозначают знаком +, 5-9 личинок - знаком ++ , 10-19 - знаком +++, 20 и более - знаком + + + +. Количественный учет удобнее проводить на окрашенных препаратах.
Исследование на трихинеллез, цистицеркоз и Шистосоматозы
Выявление личинок трихинелл
Компрессионный метод. Кусочек двуглавой или икроножной мышцы (вблизи сухожилия), взятой хирургическим путем с соблюдением асептики, расщепляют препаровальными иглами на отдельные тонкие волоконца, сдавливают их между двумя предметными стеклами в капле глицерина так, чтобы препарат был тонким и прозрачным. Под микроскопом с затемненным полем зрения хорошо видны личинки трихинелл. Эффективно исследование нескольких кусочков мышц в компрессориумах, используемых в вет.-сан. практике, особенно в специальных трихинеллоскопах.
Метод переваривания Бечмена (G. W. Bachman, 1928). 1 а измельченных мышц заливают 60 мл искусственного желудочного сока (0,5 г пепсина; 0,7 мл концентрированной соляной к-ты; 100 мл воды) и выдерживают 18 час. в термостате при t° 37°; верхний слой жидкости сливают, к осадку добавляют теплой воды (t° 37-45°) и выливают в аппарат Берманна. Через час жид-, кость спускают в пробирку, центрифугируют и исследуют осадок. Если личинки заключены в обызвествленные капсулы, их предварительно декальцинируют в растворе соляной, азотной, или серной к-ты.
Биопроба . Кусочки исследуемых мышц скармливают белым мышам или крысам. Через 2-3 дня можно обнаружить половозрелых трихинелл в дуоденальном содержимом, а через 2-3 нед.- личинок в мышцах диафрагмы и языка.
Гистологические срезы. Кусочки мышц фиксируют в жидкости Буэна, Ценкера или др.; обычным способом готовят срезы на микротоме и окрашивают их гематоксилином Делафильда.
Выявление цистицерков
Кусочек экстирпированной мышцы, соединительной ткани и пр. осматривают невооруженным глазом, осторожно выделяют цистицерк - беловатый полупрозрачный пузырек размером 1-2 см, раздавливают его между двумя предметными стеклами в капле глицерина и исследуют под микроскопом. Для определения жизнеспособности выделенных из тканей цистицерков их выдерживают в 50% растворе желчи на физиол. растворе в термостате при t° 37°; через 10-60 мин. головка жизнеспособного цистицерка выворачивается наружу. Обызвествленных цистицерков предварительно декальцинируют 4% раствором азотной к-ты в течение часа.
Выявление яиц шистосом
При хрон, формах шистосоматозов, когда образование гранулем препятствует выходу яиц из тканей в просвет кишечника или в мочевыводящие пути, применяют биопсию слизистой оболочки прямой кишки, к-рую производят специальной ложкой при помощи ректоскопа, выбирая участок с видимым поражением. Биопсированный кусочек раздавливают между двумя предметными стеклами и исследуют под микроскопом. При отрицательном результате кусочки просветляют в 4% растворе едкой щелочи и готовят из них гистол. срезы. Биопсию слизистой оболочки тощей кишки производят перорально и полученный материал исследуют комперссионным методом или готовят из него гистол, срезы. В ряде случаев моче-полового шистосоматоза диагноз может быть поставлен только на основании эндовезикальной биопсии. При гепатолиенальной форме шистосоматоза производят пункционную биопсию печени; из полученного материала готовят гистол, срезы и исследуют их под люминесцентным микроскопом. Люминесцентный микроскоп с темным полем использования и для исследования тканей печени на яйца шистосом. При поражении шистосомами женских половых путей выделения собирают при помощи влагалищного зеркала или берут острой ложечкой кусочки слизистой оболочки шейки матки; полученный материал исследуют под микроскопом на стекле в капле физиол, раствора.
Исследование на энтеробиоз и тениидозы
Перианальный соскоб (рекомендуется брать вечером, через 1 - 1,5 часа после того, как пациент лег спать, или утром до совершения туалета). Спичкой, срезанной наискось и смоченной в капле жидкости (физиол, раствор, кипяченая вода или 2% раствор двууглекислой соды), нанесенной на предметное стекло, осторожно делаю? соскоб со слизистой оболочки ануса и складок вокруг него (от центра кнаружи). Собранную на конце спички слизь счищают краем покровного стекла в каплю жидкости на предметном стекле и, покрыв этим же покровным стеклом, исследуют. При массовых обследованиях, когда соскобы берут в детских или других учреждениях, использованную спичку помещают в каплю жидкости на предметном стекле, после подсыхания капли покрывают другим предметным стеклом и доставляют в лабораторию, завернув в бумагу и закрепив резинкой. Для исследования ректальной слизи пользуются специальным прибором - трубочкой Шахматова или Циманна, с помощью которых берут слизь из прямой кишки и исследуют мазки под микроскопом.
Метод с ватным тампоном. Пациентам на дом выдают пробирку с ватным тампоном на стеклянной или деревянной палочке; утром пациент протирает перианальные складки тампоном, Смоченным кипяченой водой, и помещает его в пробирку с небольшим количеством воды. В лаборатории тампоны прополаскивают в той же пробирке с новой порцией воды и осадок исследуют после центрифугирования.
Целлофановый метод Холла (М. С. Hall, 1937). Квадратный кусочек целлофана укрепляют резинкой на стеклянной палочке. Соскоб делают сухим целлофаном и помещают его в пробирку. В лаборатории целлофан слегка сдвигают с палочки и, срезав его кончик ножницами, расправляют на предметном стекле; смочив децинормальным раствором едкого натра, покрывают покровным стеклом и исследуют под микроскопом.
Метод с целлюлозной лентой Грэма (С. F. Graham, 1941). Полоску целлюлозной ленты прижимают клейкой стороной к перианаль-ным складкам обследуемого, затем той же стороной к предметному стеклу и исследуют без покровного стекла; можно добавлять каплю толуена. В. В. Каледин (1972) для этих целей предложил применять целлулоидные диски, вырезанные из отмытой рентгеновской пленки и смоченные глицерином; диски исследуют на предметном стекле в капле силикатного клея. Методом с целлюлозной лентой можно исследовать также нательное белье детей.
Подногтевой соскоб. Края ногтя, ногтевое ложе, подногтевые пространства смачивают 0,5-1% раствором едкой щелочи и протирают влажными ватными тампончиками. Тампоны помещают в центрифужные пробирки с этим же раствором, центрифугируют и исследуют осадок.
Методы исследования объектов окружающей среды на яйца и личинки гельминтов (санитарно-гельминтологические исследования)
Исследования проводят с целью определения степени загрязненности яйцами и личинками гельминтов объектов внешней среды. Полученные данные используют для оценки сан. состояния учреждений и предприятий и эффективности проводимых мероприятий по борьбе с гельминтозами.
При изучении степени загрязненности различных объектов окружающей среды яйцами и личинками гельминтов и оценки их роли в эпидемиологии гельминтозов важно установить не только число найденных яиц, но и их жизнеспособность и инвазионность, которые определяют: а) по внешнему виду, под микроскопом; б) окрашиванием различными красителями, в т. ч. люминесцентными; как правило, живые яйца и личинки не окрашиваются; в) культивированием в оптимальных условиях до инвазионной стадии; г) заражением лабораторных животных (биопроба).
Исследования воды и канализационных стоков. Для одного исследования используют 10-25 л воды (рек, морей, прудов, купальных бассейнов, водопровода) и 1-2-5 л канализационных стоков.
Метод 3. Г. Васильковой (1941). Воду или канализационные стоки фильтруют через мембранные ультрафильтры в аппарате Гольдмана, состоящем из стеклянной или металлической воронки с фильтрами, соединенной при помощи кольца-насадки с колбой Бунзена. Для ускорения процесса фильтрации к аппарату подключают вакуумный насос. После фильтрации мембранные фильтры просматривают под микроскопом, просветлив их 50% раствором глицерина; скопившийся осадок счищают и просматривают отдельно в виде мазков. Применяются фильтровальные аппараты и других конструкций.
Метод Г. Ш. Гуджабидзе и Г. А. Юдина (1963) для исследования канализационной жидкости. 1 л жидкости отстаивают 2 часа в цилиндре Лисенко; полученный осадок (5-9 мл) обрабатывают, как при исследовании почвы (см. ниже).
Метод Н. А. Романенко (1967). К 1л сточной жидкости, помещенной в стеклянный цилиндр емкостью 1200-1500 мл, добавляют 0,4-0,6 г сернокислого алюминия или хлорного железа (с целью коагулирования, ускоряющего процесс осаждения взвешенных частиц) и через 40 мин. смесь центрифугируют 3 мин. при 1000 об/мин; верхний слой сливают, а для растворения хлопьев добавляют 1-2 мл 3% раствора соляной к-ты, затем 150 мл насыщенного раствора азотнокислого натрия. Осадок исследуют, как почву.
Исследование почвы
Загрязненность почвы яйцами гельминтов определяют с целью выявления очагов гельминтозов и оценки эффективности работы по их оздоровлению.
Метод 3. Г. Васильковой и В. А. Гефтер (1948). 12,5 г почвы смешивают в пробирках (объемом 100 мл) из нержавеющей стали или латуни с 20 мл 5% раствора едкой щелочи, добавив 10 стеклянных бусинок или мелких камешков. Пробирки закрывают резиновыми пробками и встряхивают в течение 20 мин. в аппарате для встряхивания или вручную. Вынув пробки, пробирки центрифугируют 3-5 мин., поверхностную жидкость сливают, к осадку добавляют 60-80 мл насыщенного раствора азотнокислого натрия и, тщательно перемешав, вновь центрифугируют 3-5 мин. В сю поверхностную пленку со всплывшими яйцами снимают, прикасаясь к поверхности смеси сложной петлей (5-6 петель, соединенных на общем стержне), и переносят в стаканчик с водой; перемешивают с тем же раствором, центрифугируют; всю процедуру повторяют не менее 3 раз. Содержимое стаканчика, куда переносят пленку, разбавляют водой и фильтруют через мембранные фильтры, которые исследуют под микроскопом в капле глицерина.
Метод 3. Г. Васильковой и В. А. Гефтер в модификации А. А. Намитокова (1961) отличается от основного метода тем, что вместо исследования препаратов пленки используют половину содержимого пробирки (каждый раз добавляя новую порцию насыщенного раствора азотнокислого натрия), фильтруют и исследуют фильтры.
Н. А. Романенко (1968) рекомендует исследовать на яйца гельминтов пробы почвы и осадка сточных вод с помощью аппарата, предложенного Г. Ш. Гуджабидзе. 50 г почвы тщательно перемешивают в течение 1 мин. в 150 мл воды в центрифужных пробирках (емкостью 250 мл) специальными лопастями, которые приводятся в действие электромотором. Смесь центрифугируют 3 мин. при 1000 об/мин, воду сливают и, добавив 150 мл насыщенного раствора азотнокислого натрия, перемешивают и снова центрифугируют 3 мин. Пробирки с пробами устанавливают в штатив, доливают раствор азотнокислого натрия до образования выпуклого мениска, покрывают предметными стеклами (10 х 6 см) и отстаивают 10-15 мин., затем стекла снимают и исследуют; процедуру повторяют не менее 4 раз.
Исследование на личинки гельминтов по методу Берманна (1917). 200-400 г почвы помещают в кусочке марли на металлическую сетку (с диам, отверстий 1-2 мм), надетую на широкую часть стеклянной воронки, укрепленной в штативе. На узкий конец воронки натянута резиновая трубка с зажимом. Воронку наполняют теплой (t° 50°) водой так, чтобы нижняя часть сетки с почвой соприкасалась с водой. В силу термотропности личинки активно выползают в теплую воду и, оседая, скапливаются в нижней части резиновой трубки над зажимом. Через 3-4 часа из воронки выпускают в пробирку 50 мл содержимого, центрифугируют и исследуют осадок.
Исследование овощей, фруктов и ягод
Исследуют преимущественно овощи, ягоды и фрукты, употребляемые в пищу без термической обработки. Метод 3. Г. Васильковой (1948). По 5-10 штук овощей или фруктов (ок. 0,5 кг) или 100- 200 г зелени (салат, зеленый лук) заливают на несколько часов водой в широкогорлых стеклянных банках с притертыми пробками и встряхивают 10-20 мин. в аппарате для встряхивания или вручную. Воду сливают, исследуемые объекты прополаскивают чистой водой и всю смывную воду фильтруют в аппарате Гольдмана; фильтры исследуют, просветлив глицерином. Можно подкрашивать фильтры 25% раствором Люголя в глицерине; при этом яйца гельминтов окрашиваются в коричневый цвет и их легко распознать среди крахмальных зерен, окрашенных в синий цвет. Большой осадок обрабатывают, как почву.
Исследование смывов с предметов обихода и с рук. Кисточкой для клея (или ватным тампоном, обернутым кусочком капроновой ткани), смоченной в 2% растворе двууглекислой соды, многократно проводят по обследуемому предмету или рукам, после чего ополаскивают в том же растворе, налитом в пробирку. В лаборатории кисточки и тампоны прополаскивают чистой водой; все смывные воды центрифугируют и исследуют осадок.
Метод В. А. Гефтер (1960). Пыль с мягкого инвентаря эффективнее собирать при помощи пылесоса, подключенного к воронке, к-рая состоит из 2 разъемных частей: на поверхность нижней части, покрытой металлической или пластмассовой сеткой, помещают мембранный фильтр и укрепляют его, надев верхнюю часть воронки. Собранную воронку присоединяют к шлангу пылесоса резиновой трубкой. Пыль с предмета собирают в течение 3 мин., после чего фильтр вынимают и заменяют новым. В лаборатории фильтры просматривают под микроскопом, просветлив их глицерином. Если слой пыли на фильтре велик, его соскабливают и просматривают в виде мазков или обрабатывают, как почву.
Иммунологические методы диагностики
Возможность использования иммунол. методов для диагностики гельминтозов обусловлена способностью гельминтов продуцировать активные антигены, воздействующие на иммунокомпетентные клетки хозяина и стимулирующие продукцию антител. Наиболее эффективны иммунодиагностические методы при кишечных гельминтозах, когда секреты и экскреты гельминтов, обладающие антигенной активностью, попадают непосредственно в кровь хозяина. Иммунол, реакции используют для диагностики аскаридоза, трихинеллеза, филяриатозов, шистосоматозов, эхинококкоза и альвеококкоза, цистицеркоза, парагонимоза, симптомокомплекса larva migrans- (токсокароз, ангиостронгилез) и др. Применяют различные серол, тесты (реакции преципитации, агглютинации, связывания комплемента, флюоресцирующих антител) и внутрикожные аллергические пробы. Антигены готовят из личинок и половозрелых гельминтов, используя солевые экстракты гомогенатов свежезамороженных или лиофилизированных тканей, а также разные биологически активные жидкости (жидкость из эхинококковых пузырей, полостную жидкость аскарид и др.). В связи с тем что гельминты обладают весьма сложной антигенной структурой и в их антигенной мозаике имеются компоненты и отдельные детерминанты, перекрестно реагирующие с другими видами гельминтов, бактериями, антигенами хозяина, разрабатываются методы очистки их от неспецифических компонентов. Фракционирование проводят разными методами: гель-фильтрацией в колонках с сефадексами, ионообменной хроматографией на ДЕАЕ-сефадексе, обработкой кислотами и др. Фракционные антигены обладают обычно более высокой специфичностью, чем цельные экстракты, активность же их приблизительно одинакова. Иммунодиагностические методы находят все большее применение. Реакции используют не только для наиболее полного и раннего выявления больных, но и для исследования очагов и изучения эпидемиологии гельминтозов.
Серологические реакции. Реакцию микропреципитации на живых личинках применяют для диагностики нематодозов - преимагинальной фазы аскаридоза, анкилостомидозов, трихинеллеза. Реакция становится положительной через 5- 10 дней после заражения (аскаридозом, анкилостомидозами) и сохраняется в течение 90-100 дней. Антигеном служат живые личинки нематод, выделенные из тканей экспериментально зараженных лабораторных животных. Выделенных личинок тщательно отмывают от белков хозяина стерильным физиол, раствором и дистиллированной водой и по 10-15 экз. помещают с помощью пастеровской пипетки на стерильное предметное стекло с луночкой. Наносят 2-3 капли испытуемой сыворотки, накрывают стерильным покровным стеклом, заключают во влажную камеру (чашка Петри, выстланная увлажненной фильтровальной бумагой) и выдерживают 24-48 час. в термостате при t° 37°. При положительной реакции под малым увеличением микроскопа видны вокруг ротового и анального отверстий личинок серовато-белые, слегка опалесцирующие массы преципитатов шаровидной или зигзагообразной формы. Эффективность реакции достигает 85-95% .
Реакция кольцепреципитации разработана В. П. Пашуком (1957) для диагностики трихинеллеза. Реакция становится положительной на 2--3-й неделе болезни. Эффективность ее достигает 80-90% . Антигеном служит экстракт порошка из высушенных при t° 35° личинок, выделенных из мышц зараженных животных. В пробирки диам. 0,5 см наливают по 0,1 мл каждого разведения антигена и осторожно наслаивают на него (или опускают на дно) равное количество испытуемой сыворотки так, чтобы жидкости не смешивались. Пробирки выдерживают 30 мин. в термостате при t° 37°, а затем 30- 60 мин. при комнатной температуре. При положительной реакции на границе соприкосновения антигена и сыворотки появляется беловатое нежное кольцо, легко распадающееся при встряхивании.
Реакция преципитации в геле по Оухтерлоню (О. Ouchterlony, 1949) в микромодификации А. И. Гусева и В. С. Цветкова предложена И. А. Гиновкер, Е. А. Забозлаевой, А. В. Дорониным (1970) для диагностики ранней фазы описторхоза. По предварительным данным, ее эффективность 87%. Антигеном служит экстракт гомогената свежезамороженных половозрелых описторхисов, выделенных из печени кошек.
Реакция непрямой гемагглютинации (см.) с диагностикумом - взвесью формалинизированных и танизированных эритроцитов барана, сенсибилизированных эхинококковой жидкостью,- разработана
Л. Н. Степанковской (1972) для диагностики эхинококкоза и альвеококкоза.
РНГА с диагностикумом из формалинизированных эритроцитов барана, сенсибилизированных экстрактом гомогената свежезамороженных цистицерков свиного цепня, предложена Л. М. Коноваловой (1973) для диагностики цистицеркоза мозга; она эффективна в 85% случаев.
РНГА с аскаридным диагностикумом предложена для диагностики преимагинальной фазы аскаридоза.
Реакция связывания комплемента (см.) ставится по обычной методике и используется для диагностики трихинеллеза и цистицеркоза.
Метод люминесцирующих антител (непрямой метод). Этот метод с обезжиренным сухим гомогенатом цистицерков свиного цепня в качестве антигена, фиксированным на предметном стекле, разработан JI. М. Коноваловой (1973) для диагностики цистицеркоза человека. Та же реакция с гистол, срезами личинок трихинелл в качестве антигена разработана для диагностики трихинеллеза.
E. С. Лейкина, В. А. Гефтер.
При проведения этого метода собирают свежие порции фекалий от животных, их кладут в сосуд, заливают водой в соотношении 1:5 и 1:10, тщательно перемешивают. Взвесь оставляют на 5 мин. для осаждения. Затем верхний слой сливают до осадка, после чего снова заливают водой и повторяют эти операции до тех пор, пока жидкость над осадком не будет прозрачной. После надосадочную жидкость сливают последний раз, а осадок помещают в кювет или чашку Петри для исследования под лупой. Так как одни гельминты хорошо видны на белом фоне, а другие на черном, то для более полной выборки гельминтов чашку Петри ставят то на белую, то на черную бумагу. Гельминты выбирают препаровальной иглой или кисточкой, а затем микроскопируют для установления вида, при этом пользуются ручной, а также штативной лупой или стереоскопическим микроскопом.
2.2. Метод отсеивания
При этом методе используют набор из 2 – 4 металлических сит с отверстиями убывающего диаметра. Струей воды промывают фекалии, при этом частицы фекалий уносятся водой, а гельминты в зависимости 6v величины задерживаются на разных ситах. Затем гельминтов выбирают и исследуют. Этим методом можно собрать гельминтов разной величины
3. Методы гельминтоовоскопии
Гельминтоовоскопия (от латинского ovum – яйцо, греческого skopeo – смотрю) объединяет группу методов исследования, с помощью которых выявляют яйца возбудителей гельминтозов.
Предложено много методов овоскопии. Но не все они заслуживают практического внимания: одни сложны по технике выполнения, при исследовании другими требуется значительное время, третьи малоэффективны. В данной работе мы приведем только те методы, которые заслуживают практического внимания.
Удельный вес яиц тяжелее обычной воды, вследствие этого яйца гельминтов, как более тяжелые частички вымываются из фекалий водой и оседают на дно сосуда с различной скоростью, в зависимости от удельного веса, Быстрее всего оседают яйца более крупного размера.
В растворах же солей высокого удельного веса яйца гельминтов наоборот всплывают (явление флотации) в верхний слой и концентрируются в нем.
На использовании этих физических закономерностей основала технология всех современных методов гельминтоовоскопии, которые подразделяются на три группы:
а) Методы осаждения (седиментации) яиц гельминтов;
б) Методы флотации яиц гельминтов;
в) Комбинированные методы (осаждения и флотации) яиц гельминтов.
3.1. Методы осаждения (седиментации)
Основаны на принципе осаждения взвешенных в жидкости яиц гельминтов, промывки осадка и исследования его. Эти методы применяются в основном для диагностики тех гельминтозов, возбудители которых выделяют яйца с высоким удельным весом (фасциолез, дикроцелиоз, парамфистоматоз, описторхоз и др.). Методики осаждения менее эффективны и более трудоемки, чем флотации. Это связано со сложностью отыскания яиц гельминтов в осадке взвеси.
3.1.1 .Метод последовательных смывов
Пробу фекалий весом 3-5 г кладут в стакан, вливают небольшое количество воды и размешивают палочкой или пинцетом до получения жидкой кашицеобразной массы, затем добавляют воду порциями до объема 50 мл при постоянном размешивании; После взвесь процеживают через металлическое сито или марлю в другой стакан, в нем отстаивают в течение 5-10 мин. Затем верхний слой жидкости над осадком сливают, а к осадку добавляют новую порцию воды и вновь отстаивают в течение 5 – 10 мин. Описанная процедура повторяется до тех-пор, пока вода не станет прозрачной. Ее в последний раз сливают, а осадок (около 5 мл) разливают на предметные стекла или стекла большего размера (12x19) и микроскопирутот.
Эта методика широко применяется в ветеринарных лабораториях для диагностики фасциолеза, дикроцелиоза, парамфистоматоза, эуриггрематоза и других гельминтозов жвачных. Вместе с тем, она трудоемка и по диагностической эффективности значительно уступает специальным флотационным и комбинированным методам гельминтоовоскопии.
Гельминтологические методы исследований . Методы диагностики гельминтозов разделяют на прямые, основанные на непосредственном выявлении самих гельминтов или их фрагментов, а также личинок и яиц гельминтов (методы исследования фекалий, мочи, желчи и дуоденального содержимого, мокроты, крови и тканей, материала, полученного при соскобе из перианальной области и подногтевых пространств), и косвенные, с помощью которых выявляют вторичные изменения, возникающие в организме человека в результате жизнедеятельности гельминтов (исследования морфологического состава крови, иммунологические методы диагностики гельминтозов, рентгенологические исследования и т.д.). Из прямых методов наиболее распространены копрологические, которые делятся на макро- и микрогельминтоскопические. В отдельных случаях используют специальные методы.
Макрогельмитоскопические методы исследования направлены на поиски гельминтов или их фрагментов (сколексов, члеников, частей стробилы цестод). Их применяют для диагностики тех гельминтозов, при которых яйца не выделяются с экскрементами больного или выделяются в небольшом количестве и не всегда (например, при энтеробиозе в фекалиях обнаруживают острицы, при тениидозах - членики).
Для обнаружения в фекалиях остриц или члеников цестод проводят просмотр фекалий невооруженным глазом. Для дифференциальной диагностики тениидозов рекомендуется просмотр разжиженных водой фекалий отдельными небольшими порциями в черных фотографических кюветах или в чашках Петри на темном фоне. Крупные образования, подозрительные на фрагменты гельминтов, рассматривают под лупой между двумя предметными стеклами. Если же по клиническим показаниям предполагают обнаружение мелких гельминтов или головок цестод после лечения, то подозрительные частицы рассматривают под лупой в капле глицерина, а в случае необходимости и под микроскопом.
Микрогельминтоскопические методы исследования (качественные) направлены на выявление яиц и личинок гельминтов. Применяют метод толстого мазка с целлофановой покровной пластинкой по Като. Смесь Като состоит из 6 мл 3% водного раствора малахитовой зелени, 500 мл глицерина и 500 мл 6% раствора фенола. Пластинки по Като (гидрофильный целлофан разрезают на части размером 20´ 40 мм ) погружают на 24 ч в смесь Като так, чтобы они прилегали друг к другу (3-5 мл раствора Като на 100 пластинок). 100 мг фекалий наносят на предметное стекло, накрывают целлофановой покровной пластинкой по Като и придавливают так, чтобы фекалии размазались по предметному стеклу в пределах целлофановой пластинки. Мазок оставляют при комнатной температуре для осветления на 40-50 мин, после чего просматривают под микроскопом. В жаркое время года во избежание высыхания препарата на пластинку приготовленного препарата кладут влажную губку.
Для полного выявления гельминтов всех видов метод толстого мазка с целлофановой покровной пластинкой по Като необходимо использовать в сочетании с одним из методов обогащения. Наиболее распространенными из них являются метод Калантарян и метод Фюллеборна.
Метод Калантарян: в склянках с широким горлом объемом 100 мл тщательно размешивают стеклянной палочкой 5 г фекалий, постепенно доливая насыщенный раствор нитрата натрия (1 кг азотнокислого натрия на 1 л воды при кипячении) до краев стакана. Всплывшие на поверхность крупные частицы удаляют бумажным совочком. К поверхности солевого раствора прикладывают предметное стекло (солевой раствор добавляют до полного соприкосновения смеси с предметньм стеклом). Через 20-30 мин предметное стекло снимают и пленку просматривают под микроскопом. При отсутствии данной соли можно использовать насыщенный раствор поваренной соли по Фголлеборну (400 г соли в 1 л воды при кипячении).
В связи с тем, что яйца, имеющие большой удельный вес (неоплодотворенные яйца аскарид, яйца трематод и крупных цестод), не всплывают, помимо исследования поверхностного слоя жидкости, при использовании метода Фюллеборна необходимо просмотреть под микроскопом 2-4 препарата из осадка.
Специальные лабораторные методы исследований на различные гельминтозы.
Чаще всего заражение гельминтами происходит через зараженную пищу, воду, а также через немытые руки.
Прямые и косвенные методы диагностики гельминтозов
На сегодняшний день разработано множество методов диагностики гельминтозов, однако всех их можно разделить на две большие группы: прямые и косвенные. К прямым методам диагностики относятся те исследования, которые позволяют непосредственно выявить гельминты, их фрагменты, личинки или яйца. Косвенные методы диагностики гельминтозов основываются на выявлении вторичных изменений, характерных для той или иной разновидности гельминтоза.
Самыми популярными прямыми методами диагностики гельминтозов являются макро- и микрогельминтоскопические методы исследований.
Макрогельминтоскопические методы исследования
Вопросы читателей
18 October 2013, 17:25 Добрый день. Уже около почти год ощущаю зуд вокруг анального отверстия. Никаких болевых ощущений. Подскажите к кому обратится и что это может быть? Спасибо
Задать вопросМикрогельминтоскопические методы исследования
Иммунологические методы исследования
Диагностики гельминтозов основаны на обнаружении в сыворотке крови специфических антител к тем или иным гельминтам. Для иммунологического исследования применяется метод непрямой гемагглютинации, иммуноферментного анализа, иммуноэлектрофореза, иммуноабсорбции и другие серологические методы исследований крови.
Иммунологические методы исследования применяются для диагностики альвеококкоза, эхинококкоза, цистицеркоза, аскаридоза, шистосомоза и других гельминтозов.
Анализ желчи и дуоденального содержимого
Биопсия
Электропунктурная диагностика
Электропунктурная диагностика основана на анализе сопротивления кожи при раздражении ее слабым электрическим током. Электропунктурная диагностика при подозрении на гельминтоз может проводиться двумя способами: по методу Фолля или с помощью резонансного тестирования.
Инструментальные методы исследования
При гельминтозах также проводится ультразвуковое исследование, ФЭДГС, и компьютерная диагностика. Эти методы позволяют определить степень вреда, нанесенного гельминтами, а также определить состояние отдельных органов.