Descubierta en 1942 por Koons, la reacción de inmunofluorescencia no es un método de investigación nuevo. Sin embargo, la llegada de las tecnologías de hibridoma, que permitieron obtener anticuerpos monoclonales, dio una “segunda vida” a esta reacción, ya que su uso permitió aumentar varias veces la sensibilidad de esta reacción y su especificidad.

Y hoy te contamos en detalle sobre la reacción de inmunofluorescencia directa e indirecta (RIF) como método de diagnóstico de Koons para hombres y mujeres adultos durante el embarazo.

¿Qué es una reacción de inmunofluorescencia?

La reacción de inmunofluorescencia, que representa una excelente oportunidad para obtener rápidamente un diagnóstico preciso, permite determinar la presencia del agente causante de la enfermedad en el material patológico. Para ello se utiliza un frotis de material, que se procesa especialmente con FITC (isotiocianato de fluoresceína) marcado y se estudia como un análisis heterogéneo.

Para obtener el resultado se utiliza un microscopio fluorescente; su sistema óptico contiene un conjunto de filtros de luz para proporcionar al fármaco luz azul violeta o ultravioleta de una longitud de onda determinada. Esta condición permite que el fluorocromo se refleje dentro de un rango determinado. El investigador evalúa las propiedades del resplandor, su carácter, el tamaño de los objetos y sus posiciones relativas.

¿A quién se prescribe?

Se puede prescribir una reacción de inmunofluorescencia para el diagnóstico de muchas enfermedades virales. En particular, se prescribe durante un examen completo para identificar los siguientes factores:

• la presencia de un virus en el cuerpo;
• infección por salmonela;
• la existencia de ciertos antígenos en el cuerpo;
• se identifica la probabilidad de infección del cuerpo con clamidia, micoplasma y otros microorganismos que tienen la capacidad de causar enfermedades virales en humanos;
• Diagnóstico de enfermedades virales en animales.

Las indicaciones enumeradas permiten utilizar la reacción de inmunofluorescencia para detectar enfermedades virales de diversa naturaleza en el cuerpo humano y animal.

Objetivos

Dado que este método de diagnóstico tiene muchas ventajas, que incluyen su alta eficiencia, rapidez de implementación y obtención de resultados, así como la ausencia de una gran cantidad de contraindicaciones, se utiliza para determinar la presencia de infecciones virales en el cuerpo. Por lo tanto, este análisis se puede prescribir tanto para establecer como para aclarar el diagnóstico, en base al cual se prescribe un régimen de tratamiento.

El procedimiento no causa molestias; requiere la obtención de material para análisis, que se extrae de cualquier líquido corporal: saliva, esputo, raspados de la superficie de las mucosas. También se puede extraer sangre para realizar pruebas. La frecuencia de la reacción de inmunofluorescencia la prescribe el médico tratante, quien necesita obtener datos sobre la dinámica de los procesos que ocurren en el cuerpo.

Dado que esta prueba no causa daño ni al cuerpo ni al bienestar general de una persona, se puede prescribir según sea necesario.

Tipos de tal procedimiento.

Hoy en día se utilizan varios tipos de este análisis, cada uno de los cuales tiene una serie de características específicas y permite obtener la imagen más detallada de los procesos que ocurren en el cuerpo.

Los tipos de reacción de inmunofluorescencia incluyen:

1. - uno de los tipos de diagnóstico de más rápido desarrollo, este análisis permite obtener datos cuantitativos sin el uso de diluciones en serie. Utilizando las mediciones obtenidas de la densidad óptica del líquido, es posible determinar con precisión el nivel de concentración del componente deseado. Las amplias posibilidades de este tipo de análisis se aprovechan cuando se utilizan anticuerpos monoclonales para su implementación, lo que permite determinar la fase del proceso infeccioso y su gravedad;
2. diagnóstico de ADN- este método se basa en la unión complementaria de nucleótidos, para lo cual se pueden utilizar líquidos como saliva, sangre, líquido cefalorraquídeo, orina, esputo, muestras de biopsia y sangre. Este método detecta de manera más efectiva la presencia de virus del papiloma en el cuerpo; sin embargo, muchos sistemas de prueba modernos ocasionalmente pueden dar resultados falsos positivos y falsos negativos. Pueden ser causados ​​por contaminación de muestras líquidas para análisis de ADN específico, cuya presencia puede ser de naturaleza anidada o total;
3. inmunocromatografía— la especificidad de este método para determinar la presencia de un entorno patológico y de virus en el cuerpo es el uso de anticuerpos marcados durante la reacción. Este método de diagnóstico se utiliza para identificar el grado de actividad del proceso de infección por estreptococos del grupo A, así como clamidia de los siguientes tipos: Clamikit R Innotech International, Clearview TM Chlamydia de Oxoid. Al poseer la mayor sensibilidad posible, los sistemas de prueba que se basan en este método de investigación. Generalmente se utilizan como prueba indicativa.

Las variedades enumeradas tienen peculiaridades de su implementación y características específicas de los resultados, pero todas ellas tienen como objetivo obtener datos sobre la presencia de microorganismos y virus patológicos en el organismo, así como sobre el grado de su reproducción y actividad.

Indicaciones para el uso

La reacción de inmunofluorescencia se puede prescribir para identificar cualquier tipo de entorno patológico en el cuerpo.

En este tipo de diagnóstico se determinan clamidia, trichomonas, gonococos y, además, giardia de todos los tipos. y otras enfermedades también requieren RIF. Se requiere cita médica para su implementación.

Contraindicaciones para

Dado que esta reacción requiere cualquier tipo de líquido corporal como material de prueba, su obtención no suele ser difícil y no existen contraindicaciones para realizar la reacción de inmunofluorescencia. Sin embargo, durante el embarazo y en niños menores de 6 meses, la recogida de material para la investigación se realiza con las máximas precauciones.

La ausencia de contraindicaciones permite realizar este tipo de diagnóstico cuando lo prescribe un médico a todos los pacientes. Su seguridad está garantizada por el uso de instrumentos desinfectados y jeringas desechables.

Preparación para el procedimiento.

No existen particularidades respecto a la recolección de material para este análisis. Para esto, la sangre se extrae con el estómago vacío para que no contenga un mayor contenido de sustancias que puedan cambiar las lecturas verdaderas y dar una imagen falsa.

¿Cómo se toma la prueba?

Dado que no se requiere ninguna preparación especial para el análisis, solo se excluye comer 12 horas antes de la prueba y la ausencia del uso de medicamentos, el material de prueba se toma como un proceso normal de toma de líquido corporal para el análisis.

Las sensaciones subjetivas durante el procedimiento pueden variar según la sensibilidad.

Decodificando los resultados

El uso de sistemas de prueba modernos le permite obtener los resultados de análisis más precisos. Para descifrar el resultado se utilizan los siguientes datos:

• grado de intensidad de fluorescencia;
• sombra de fluorescencia;
• la naturaleza periférica del proceso de luminiscencia del objeto;
• características de morfología, ubicación del patógeno en un frotis del material de prueba y su tamaño.

Al estudiar objetos grandes (por ejemplo, Gardenerella, Trichomonas, células que ya están infectadas con virus), los criterios anteriores permiten obtener los resultados más confiables. Sin embargo, los cuerpos elementales de micoplasma y clamidia tienen tamaños que se encuentran en el límite de la capacidad de resolución de un microscopio fluorescente, lo que dificulta

Esto dificulta la obtención de un resultado preciso, ya que el brillo periférico pierde parte de su intensidad. Los criterios restantes ya no son suficientes para una identificación precisa de los microorganismos en estudio. Por este motivo, se imponen requisitos especiales a los especialistas que realizan este tipo de investigación: su nivel de cualificación debe ser suficiente para trabajar con los datos disponibles.

Por este motivo, sólo un médico con el nivel de cualificación adecuado puede interpretar el análisis obtenido. Lea a continuación sobre el precio de la investigación utilizando el método RIF.

costo promedio

El precio de una reacción de inmunofluorescencia depende de la ubicación y el nivel de la institución médica, así como de las calificaciones del especialista que realiza el análisis. Hoy el coste oscila entre 1.280 y 2.160 rublos.

El siguiente vídeo le brindará más información sobre las reacciones inmunológicas:

Hay dos opciones para organizar la RIF (reacción de Coons): reacciones de inmunofluorescencia directa e indirecta.

El RIF directo es una reacción simple de un solo paso, pero dado que requiere una gran cantidad de

sueros antimicrobianos marcados, luego se coloca con menos frecuencia de forma indirecta, cuya colocación está garantizada por un antisuero marcado.

El RIF indirecto es una reacción de dos pasos en la que el antígeno se une primero al suero de especies no marcadas y luego el complejo inmunológico antígeno-anticuerpo formado se trata con un antisuero marcado con FITC que contiene anticuerpos contra la inmunoglobulina de este complejo. Habitualmente, en la etapa I de su producción, se utiliza como suero de especie suero inmune de conejo obtenido inmunizando animales con el microorganismo correspondiente, y en la etapa II, suero anti-conejo de burros u otros animales inmunizados con gammaglobulinas de conejo marcado con FITC ( Figura 9).

Configuración de un RIF directo. En un portaobjetos de vidrio sin grasa, se hacen frotis finos del material que se examina y se hacen frotis de huellas dactilares de órganos y tejidos. Las preparaciones se secan, se fijan, se les aplica suero luminiscente tomado en una dilución de trabajo y se colocan en una cámara húmeda a una temperatura de 37 ° C durante 20-30 minutos (durante 25-40 minutos a temperatura ambiente). Luego, para eliminar el exceso de anticuerpos fluorescentes, la preparación se lava en una solución isotónica tamponada de cloruro de sodio durante 10 a 15 minutos, seguido de enjuague con agua destilada o corriente durante 10 minutos. Secar a temperatura ambiente y examinar bajo un microscopio de fluorescencia utilizando un sistema de inmersión en aceite.

Para evaluar la intensidad de la fluorescencia específica de las células bacterianas, se utiliza una escala de más de cuatro: “++++”, “+++” - muy brillante y brillante; “++”, “+”: fluorescencia de las células de color verde colónico pronunciada y débil. Se requieren tres controles: 1) tratamiento con anticuerpos fluorescentes de bacterias homólogas (control positivo); 2) cultivo heterólogo (control negativo); 3) material no contaminado (control negativo).

RIF anticomplementario. La reacción es una modificación de RSC, cuyo sistema indicador son los anticuerpos anticomplementarios marcados con FITC (Fig. 10).

El RIF anticomplementario indirecto se realiza de la siguiente manera: la preparación del antígeno se prepara en un portaobjetos de vidrio, como para el RIF, pero en la etapa I se trata no solo con suero inmune, sino con su mezcla con complemento de cobaya, y en la etapa II con un antisuero que contiene anticuerpos contra el complemento marcados con FITC. El uso generalizado de RIF anticomplementario está limitado por la dificultad de obtener anticuerpos anticomplementarios y el método de "etiquetarlos".

ARRECIFE

La reacción de inmunofluorescencia se basa en la interacción de anticuerpos contra la clamidia con el antígeno de clamidia específico del género. Hay dos tipos de reacción de inmunofluorescencia: directa e indirecta. En el primer caso, el anticuerpo específico se marca directamente con fluorocromo y la reacción se produce en un solo paso, lo que reduce significativamente el tiempo de investigación. En el segundo caso, el anticuerpo específico no está marcado y, para detectar el complejo AG-AT formado en la primera etapa, se utilizan segundos anticuerpos marcados específicos de anticuerpos anticlamidiales. El resultado de la reacción se evalúa visualmente utilizando un microscopio fluorescente.

Además de los importados, han aparecido kits nacionales para diagnosticar la infección por clamidia mediante reacción de inmunofluorescencia directa, que son prácticamente iguales en especificidad y sensibilidad, pero tienen un precio significativamente menor.

El material para el estudio son frotis dactiloscópicos preparados de acuerdo con la normativa. Los frotis para RIF se preparan en vasos especiales calcados dentro de un área limitada con un diámetro de 8 a 10 mm. Después de esto, se secan al aire y se fijan sumergiéndolos en alcohol etílico frío al 96% (preferiblemente absoluto) durante 5 a 10 minutos o aplicando 0,1 - 0,15 ml de acetona anhidra enfriada a la preparación hasta que se evapore por completo. Los preparados fijos pueden examinarse inmediatamente o, si es necesario, almacenarse a temperatura ambiente durante 24 horas o a -20°C durante 2 semanas (es necesario excluir el acceso a la humedad durante el almacenamiento y llevar el preparado a temperatura ambiente antes del examen con un plástico bolsa y gel de sílice).

Al realizar RIF directo, se aplica una solución de anticuerpos marcados a la preparación en la cantidad necesaria para cubrir completamente el frotis (25 - 30 μl). El fármaco se incuba en posición horizontal en una cámara húmeda durante 15 minutos a +37°C. El secado del reactivo es inaceptable para evitar resultados falsos positivos. A continuación, el frotis se lava con agua corriente durante 30 segundos, se enjuaga con agua destilada, se seca y se prepara para microscopía.

Al realizar RIF indirecto, se aplica a la preparación la cantidad requerida de solución de anticuerpos anti-clamidias y la primera incubación se lleva a cabo en las mismas condiciones que para RIF directo. Luego la preparación se lava, se seca al aire y se aplica un segundo reactivo: anticuerpos marcados contra clamidia y también se lleva a cabo una segunda incubación en una cámara húmeda a +37°C durante 15 minutos. Después del lavado, la muestra se seca y se prepara para microscopía. Se recomienda ver inmediatamente los preparativos terminados. Si es necesario, es posible almacenar los preparados coloreados durante 1 - 2 días a +2-8°C en un lugar oscuro y sin acceso a la humedad.

La microscopía se realiza mediante un sistema de inmersión. Hay dos opciones para la microscopía de inmersión:

1. Inmersión en aceite: Aplicar 20 - 25 µl de líquido de montaje (glicerol, tamponado con tampón fosfato con pH 7,2 - 7,6) a la preparación seca terminada, cubrirla con un cubreobjetos sin grasa, sobre el cual se coloca una gota de producto no fluorescente. Luego se aplica aceite de inmersión y se examina microscópicamente con una lente objetivo (marcada “L” ” - luminiscente) con un aumento de 90 y un ocular con un aumento de 5.

2. Inmersión en agua: se aplica una gota de 20 μl de tampón fosfato con pH 7,4 a la preparación terminada y se examina microscópicamente con una lente de inmersión en agua (marcada con una franja blanca y "L" - luminiscente) con un aumento de 60 y un ocular con un aumento de 5. La inmersión en agua proporciona un brillo más uniforme, brillante y claro.

RIF le permite identificar estructuras antigénicas de cuerpos elementales y reticulares. Los ET se encuentran predominantemente extracelularmente, de forma redonda con bordes lisos, pequeños (tamaño 1:100 - 1:150 en relación con las células circundantes), estructura homogénea, tienen un brillo verde esmeralda específico brillante que, cuando se usa con un microtornillo, puede producir anillos de difracción (anillos) Dilektorsky). Los RT son mucho menos comunes, se localizan predominantemente intracelularmente, tienen una estructura menos uniforme, son más polimórficos, pero también con bordes claros y tienen un brillo verde esmeralda brillante y específico. Cualquier otro material fluorescente de forma irregular, con bordes desiguales y borrosos, que tenga un color verde tenue o un brillo de un color diferente se considera un artefacto. La intensidad, el brillo y el tono del brillo específico dependen del pH del líquido de montaje o del tampón utilizado para la microscopía. La alta intensidad de la luminiscencia FITC en un ambiente alcalino aumenta la sensibilidad del método, pero conduce a un aumento en el número de objetos con luminiscencia inespecífica y, en consecuencia, a resultados falsos positivos. En un ambiente ácido, la intensidad del brillo FITC disminuye, lo que puede dar un resultado falso negativo. La microflora que la acompaña, así como los núcleos de las células circundantes, se tiñen de forma inespecífica en varios tonos de naranja con bromuro de indio, y su citoplasma se tiñe en varios tonos de marrón ladrillo con azul de Evans.

Para obtener un resultado fiable, se recomienda observar muchos campos de visión del fármaco. El resultado se considera positivo si el preparado contiene células epiteliales y es posible detectar al menos 6 cuerpos elementales que tengan todas las características anteriores.

La detección de una cantidad menor del patógeno hace que el resultado sea cuestionable y requiere investigaciones repetidas, preferiblemente en el contexto de una provocación (comida - alcohol, medicación - inyección pirógena, masaje mecánico - uretral en una bujía). El control de la curación debe realizarse no antes de dos semanas, ya que es posible que quede material antigénico no eliminado de un patógeno no viable, lo que dará resultados falsos positivos. Al obtener 3 resultados negativos en hombres durante un mes y en mujeres durante 3 ciclos menstruales, la ausencia de manifestaciones clínicas de infección por clamidia indica recuperación.

RIF, con la preparación adecuada del paciente, el cumplimiento de las reglas para la toma de material y la estadificación de la reacción, es un método altamente sensible y específico para diagnosticar la clamidia urogenital y permite identificar el patógeno en el 90 - 95% de los pacientes. Este método es relativamente económico, fácil de realizar, muy informativo, no requiere equipos especiales costosos, permite obtener resultados rápidamente (0,5 a 1 hora) y controlar visualmente la calidad del material tomado para la investigación.

Métodos que utilizan los principios de la biología molecular.

El grupo incluye métodos de sondas de ADN y reacción en cadena de la polimerasa (PCR), que permiten identificar el material genético del patógeno en el biomaterial en estudio. Los kits para diagnosticar clamidia con sondas de ADN aún se encuentran en la etapa de desarrollo y ensayos clínicos.

La PCR se está introduciendo activamente en la práctica del diagnóstico de laboratorio. El método se basa en el aislamiento de una secuencia específica de ADN o ARN del patógeno utilizando cebadores complementarios, su posterior copia repetida y acumulación para su posterior detección mediante métodos de detección convencionales (electroforesis o ELISA). Este método tiene una alta especificidad y sensibilidad, casi acercándose al cultural, y permite detectar patógenos únicos en el material en estudio. El método PCR requiere equipos especiales y costosos, un laboratorio independiente especialmente equipado, una formación adecuada y personal médico altamente cualificado. Al mismo tiempo, la falta de certificación de los cebadores utilizados en Rusia y la experiencia suficiente en el uso del método PCR, la especificidad del material que se está probando y su frecuente contaminación con la microflora que lo acompaña (que puede dar resultados falsos positivos) no permiten juzgar claramente su valor en el diagnóstico de clamidia urogenital.

Así, en la actualidad, el método más accesible, sencillo y al mismo tiempo muy informativo para diagnosticar la clamidia urogenital y establecer la cura es la reacción de inmunofluorescencia directa (RIF). El seguimiento de la dinámica de la enfermedad y la eficacia del tratamiento debe realizarse determinando el título de anticuerpos anticlamidiales en el suero sanguíneo mediante un ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas (ELISA).

El método de inmunofluorescencia (RIF, reacción de inmunofluorescencia, reacción de Coons) es un método para detectar Ags específicos utilizando Abs conjugados con un fluorocromo. Tiene alta sensibilidad y especificidad.

Se utiliza para el diagnóstico rápido de enfermedades infecciosas (identificación del patógeno en el material de prueba), así como para la determinación de receptores Ab y de superficie y marcadores de leucocitos (inmunofenotipado) y otras células.

La detección de antígenos bacterianos y virales en materiales infecciosos, tejidos animales y cultivos celulares mediante anticuerpos fluorescentes (sueros) se utiliza ampliamente en la práctica de diagnóstico. La preparación de sueros fluorescentes se basa en la capacidad de ciertos fluorocromos (por ejemplo, isotiocianato de fluoresceína) para establecer un enlace químico con las proteínas séricas sin violar su especificidad inmunológica.

Hay tres tipos de método: directo, indirecto y con complemento. El método RIF directo se basa en el hecho de que los antígenos tisulares o los microbios tratados con sueros inmunes con anticuerpos marcados con fluorocromos pueden brillar con los rayos ultravioleta de un microscopio fluorescente. Las bacterias en un frotis tratado con un suero luminiscente brillan a lo largo de la periferia de la célula en forma de un borde verde.

El método RIF indirecto implica detectar el complejo antígeno-anticuerpo utilizando suero antiglobulina (antianticuerpo) marcado con fluorocromo. Para ello, se tratan frotis de una suspensión de microbios con anticuerpos procedentes de suero de diagnóstico antimicrobiano de conejo. Luego se lavan los anticuerpos que no están unidos a los antígenos microbianos y los anticuerpos que quedan en los microbios se detectan tratando el frotis con suero antiglobulina (anti-conejo) marcado con fluorocromos. Como resultado, se forma un complejo de microbio + anticuerpos antimicrobianos de conejo + anticuerpos anti-conejo marcados con fluorocromo. Este complejo se observa en un microscopio fluorescente, como en el método directo.

Mecanismo. Se prepara una muestra del material de prueba en un portaobjetos de vidrio, se fija sobre una llama y se trata con suero inmune de conejo que contiene anticuerpos contra antígenos patógenos. Para formar un complejo antígeno-anticuerpo, la preparación se coloca en una cámara húmeda y se incuba a 37 °C durante 15 minutos, después de lo cual se lava minuciosamente con una solución isotónica de cloruro de sodio para eliminar los anticuerpos que no se han unido al antígeno. Luego se aplica a la preparación suero antiglobulina fluorescente contra globulinas de conejo, se incuba durante 15 minutos a 37 °C y luego la preparación se lava a fondo con una solución isotónica de cloruro de sodio. Como resultado de la unión del suero antiglobulina fluorescente con anticuerpos específicos fijados al antígeno, se forman complejos luminosos antígeno-anticuerpo, que se detectan mediante microscopía de fluorescencia.

4. En el aire de la habitación de los niños de la guardería se encontraron 75 tm/m3 de estreptococos, 12 tm/m3 de estafilococos y 1 tm/m3 de bacterias de la tuberculosis. Realizar una valoración sanitaria y bacteriológica del aire y trazar un plan para su saneamiento.

BOLETO DE EXAMEN No. _54

Retrovirus. Infección por VIH (SIDA) y sus patógenos.

El virus de la inmunodeficiencia humana causa la infección por VIH, lo que resulta en el desarrollo del síndrome de inmunodeficiencia adquirida.

El agente causante de la infección por VIH es un virus linfotrópico que pertenece a la familia Retroviridae, género Lentivirus.

Propiedades morfológicas: virus que contiene ARN. La partícula viral tiene forma esférica. La envoltura está formada por una doble capa de lípidos atravesada por glicoproteínas. La envoltura lipídica se origina en la membrana plasmática de la célula huésped en la que se reproduce el virus. La molécula de glicoproteína consta de 2 subunidades ubicadas en la superficie del virión y que penetran en su envoltura lipídica.

El núcleo del virus tiene forma de cono y está formado por proteínas de la cápside, varias proteínas de la matriz y proteínas proteasas. El genoma forma dos hebras de ARN; para llevar a cabo el proceso de reproducción, el VIH tiene transcriptasa inversa o revertasa.

El genoma del virus consta de 3 genes estructurales principales y 7 genes reguladores y funcionales. Los genes funcionales realizan funciones reguladoras y aseguran la implementación de los procesos de reproducción y la participación del virus en el proceso infeccioso.

El virus afecta principalmente a los linfocitos T y B, a algunos monocitos (macrófagos, leucocitos) y a las células del sistema nervioso.

Propiedades culturales: sobre el cultivo de linfocitos y monocitos T humanos (en presencia de IL-2).

Estructura antigénica: 2 tipos de virus: VIH-1 y VIH-2 El VIH-1 tiene más de 10 genotipos (subtipos): A, B, C, D, E, F..., que se diferencian en la composición de aminoácidos de las proteínas. .

El VIH-1 se divide en 3 grupos: M, N, O. La mayoría de los aislados pertenecen al grupo M, en el que se distinguen 10 subtipos: A, B, C, D, F-l, F-2, G, H, I, K. Resistencia: Sensible a factores físicos y químicos, muere al calentarse. El virus puede sobrevivir durante mucho tiempo en estado seco, en sangre seca.

Factores de patogenicidad, patogénesis: el virus se adhiere a un linfocito, penetra en la célula y se reproduce en el linfocito. Como resultado de la multiplicación del VIH en los linfocitos, estos últimos se destruyen o pierden sus propiedades funcionales. Como resultado de la multiplicación del virus en varias células, se acumula en órganos y tejidos y se encuentra en la sangre, la linfa, la saliva, la orina, el sudor y las heces.

Con la infección por VIH, disminuye el número de linfocitos T-4, se altera la función de los linfocitos B, se suprime la función de las células asesinas naturales y se reduce la respuesta a los antígenos y la producción de complemento, linfocinas y otros factores que regulan las funciones inmunes. (IL) se altera, lo que resulta en una disfunción del sistema inmunológico.

Clínica: el sistema respiratorio se ve afectado (neumonía, bronquitis); Sistema nervioso central (abscesos, meningitis); Se producen tracto gastrointestinal (diarrea), neoplasias malignas (tumores de órganos internos).

La infección por VIH se produce en varias etapas: 1) período de incubación, que promedia de 2 a 4 semanas; 2) la etapa de manifestaciones primarias, caracterizada inicialmente por fiebre aguda y diarrea; la etapa termina con una fase asintomática y persistencia del virus, restauración del bienestar, pero se detectan anticuerpos contra el VIH en la sangre, 3) la etapa de enfermedades secundarias, que se manifiesta por daños al sistema respiratorio y nervioso. La infección por VIH termina con la última cuarta etapa terminal: el SIDA.

Diagnóstico microbiológico.

Los estudios virológicos y serológicos incluyen métodos para determinar antígenos y anticuerpos del VIH. Para ello se utilizan ELISA, IB y PCR. Los sueros de pacientes con VIH-1 y VIH-2 contienen anticuerpos contra todas las proteínas virales. Sin embargo, para confirmar el diagnóstico, en el VIH-1 se determinan anticuerpos contra las proteínas gp41, gpl20, gpl60, p24 y en el VIH-2 anticuerpos contra las proteínas gp36, gpl05, gpl40. Los anticuerpos contra el VIH aparecen entre 2 y 4 semanas después de la infección y se detectan en todas las etapas del VIH.

Método de detección del virus en sangre y linfocitos. Sin embargo, ante cualquier prueba positiva, se realiza una reacción IB para confirmar los resultados. También se utiliza la PCR, que puede detectar la infección por VIH en los períodos de incubación y clínicos tempranos, pero su sensibilidad es algo menor que la del ELISA.

Los diagnósticos clínicos y serológicos se confirman mediante estudios inmunológicos si indican la presencia de inmunodeficiencia en el paciente examinado.

Sistema de prueba inmunoabsorbente ligado a enzimas de diagnóstico para determinar anticuerpos contra el VIH: incluye un antígeno viral adsorbido en un portador, un anticuerpo anti-Ig humana. Utilizado para el serodiagnóstico del SIDA.

Tratamiento: uso de inhibidores de la transcriptasa inversa que actúan sobre las células activadas. Los medicamentos son derivados de timidina: azidotimidina y fosfazida.

Prevención. Específico - no.

La influencia de factores físicos y químicos sobre los microbios. La mutación y su importancia para la medicina práctica. Ejemplos. La importancia de la ecología.

Acción de factores químicos y biológicos.

Acción de los químicos

Los productos químicos pueden inhibir o suprimir por completo el crecimiento de microorganismos. Si una sustancia química inhibe el crecimiento de bacterias, pero después de eliminarla, su crecimiento se reanuda.

Las sustancias antimicrobianas, teniendo en cuenta su estructura química y el mecanismo de su acción bactericida sobre las bacterias, se pueden dividir en los siguientes grupos: agentes oxidantes, halógenos, compuestos metálicos, ácidos y álcalis, tensioactivos, alcoholes, colorantes, derivados de fenol y formaldehído.

Agentes oxidantes. Este grupo incluye peróxido de hidrógeno y permanganato de potasio.

Halógenos. Cloro, yodo y sus preparaciones: lejía, cloramina B, pantocida, solución alcohólica de yodo al 5%, yodinol, yodoformo.

Compuestos de metales pesados ​​(sales de plomo, cobre, zinc, plata, mercurio; compuestos organometálicos de plata: protargol, collargol). Estos compuestos son capaces de ejercer efectos tanto antimicrobianos como locales diversos sobre los tejidos del macroorganismo.

Ácidos y álcalis. La acción bactericida de ácidos y álcalis se basa en la deshidratación de microorganismos, cambios en el pH del medio nutritivo, hidrólisis de sistemas coloidales y formación de albuminatos ácidos o alcalinos.

Los tintes tienen propiedades que inhiben el crecimiento de bacterias. Actúan lentamente, pero de forma más selectiva.

El formaldehído es un gas incoloro. En la práctica, se utiliza una solución acuosa de formaldehído (formalina) al 40%. El formaldehído gaseoso y disuelto en agua tiene un efecto perjudicial sobre las formas vegetativas y de esporas de las bacterias.

Acción de factores biológicos.

La acción de los factores biológicos se manifiesta principalmente en el antagonismo de los microbios, cuando los productos de desecho de unos microbios provocan la muerte de otros.

Los antibióticos (del griego anti - contra, bios - vida) son sustancias biológicamente activas que se forman durante la actividad vital de hongos, bacterias, animales, plantas y se crean sintéticamente, capaces de suprimir y matar selectivamente microorganismos, hongos, rickettsias, virus grandes, protozoos. y helmintos individuales.

3. La reacción de la actividad biológica de las enzimas bacterianas en el reumatismo, importancia diagnóstica y práctica, papel protector de los anticuerpos contra las enzimas en la inmunidad adquirida (determinación de antihialuronidasa y anti-O-estreptolisina).

El reumatismo es una enfermedad general de carácter infeccioso-alérgico, que afecta al tejido conectivo, principalmente al sistema cardiovascular, así como a las articulaciones, los órganos internos y el sistema nervioso central. Se cree que la causa del desarrollo del reumatismo es la activación de microorganismos patógenos, principalmente estreptococos beta-hemolíticos del grupo A. Desempeña un papel importante en la etiología y patogénesis de la enfermedad reumática. En primer lugar, la enfermedad se desarrolla en el contexto de una infección estreptocócica. En segundo lugar, en la sangre de los pacientes se encuentra una gran cantidad de anticuerpos contra microorganismos de este grupo. En tercer lugar, la prevención de enfermedades se lleva a cabo con éxito con la ayuda de fármacos antibacterianos.

En la artritis reumatoide, las membranas sinoviales, por razones desconocidas, secretan grandes cantidades de la enzima glucosa-6-fosfato deshidrogenasa, que también rompe los enlaces disulfuro en la membrana celular. En este caso, hay una "fuga" de enzimas proteolíticas de los lisosomas celulares, que dañan los huesos y cartílagos cercanos. El cuerpo responde a esto produciendo citoquinas, que también incluyen el factor de necrosis tumoral α TNF-α. Las cascadas de reacciones en las células provocadas por citoquinas agravan aún más los síntomas de la enfermedad. La inflamación reumatoide crónica asociada con el TNF-α provoca muy a menudo daños en los cartílagos y las articulaciones, lo que provoca discapacidad física.

61. Reacción de inmunofluorescencia. Mecanismo, componentes, aplicación. Métodos de montaje directos e indirectos.

Hay tres tipos principales de método: directo, indirecto (fig. 13.10) y con complemento. La reacción de Koons es un método de diagnóstico rápido para identificar antígenos microbianos o determinar anticuerpos.

Método RIF directo se basa en el hecho de que los antígenos tisulares o los microbios tratados con sueros inmunes con anticuerpos marcados con fluorocromos pueden brillar con los rayos ultravioleta de un microscopio fluorescente. Las bacterias en un frotis tratado con dicho suero luminiscente brillan a lo largo de la periferia de la célula. la forma de un borde verde.

Método RIF indirecto Consiste en identificar el complejo antígeno-anticuerpo mediante suero antiglobulina (antianticuerpo) marcado con fluorocromo. Para ello, se tratan frotis de una suspensión de microbios con anticuerpos procedentes de suero de diagnóstico antimicrobiano de conejo. Luego se lavan los anticuerpos que no están unidos a los antígenos microbianos y los anticuerpos que quedan en los microbios se detectan tratando el frotis con suero antiglobulina (anti-conejo) marcado con fluorocromos. Como resultado, se forma un complejo de microbio + anticuerpos antimicrobianos de conejo + anticuerpos anticonejo marcados con fluorocromo. Este complejo se observa en un microscopio fluorescente, como en el método directo.

Como etiquetas se utilizan colorantes luminosos de fluorocromo (isotiocianato de fluoresceína, etc.).

Hay varias modificaciones de RIF. Para el diagnóstico rápido de enfermedades infecciosas, se utiliza Koons RIF para identificar microbios o sus antígenos en el material de prueba.

Según Koons existen dos métodos de RIF: directo e indirecto.

Componentes RIF directos:
1) el material que se examina (heces descargadas por la nasofaringe, etc.);
2) suero inmunológico específico marcado que contiene AT-la para el antígeno deseado;
3) solución isotónica de cloruro de sodio.
Un frotis del material de prueba se trata con antisuero marcado.
Se produce la reacción AG-AT. Durante un examen microscópico luminiscente, se detecta fluorescencia en el área donde se localizan los complejos AG-AT.

Componentes del RIF indirecto:
1) el material que se está estudiando;
2) antisuero específico;
3) suero antiglobulina (AT-la contra inmunoglobulina), marcado con fluorocromo;
4) Solución isotónica de cloruro de sodio.

Un frotis del material de prueba se trata primero con suero inmune al antígeno deseado y luego con suero antiglobulina marcado.

Los complejos luminiscentes AG-AT: AT marcados se detectan mediante un microscopio fluorescente.
La ventaja del método indirecto es que no es necesario preparar una amplia gama de sueros fluorescentes específicos, sino que solo se utiliza un suero antiglobulina fluorescente.

También existe un tipo de RIF indirecto de 4 componentes, cuando además se introduce complemento (suero de cobaya). En una reacción positiva, se forma un complejo de AG-AT - marcado - complemento AT.