Reticulocitos (importancia clínica y diagnóstico de laboratorio). Recuento de reticulocitos en un frotis después de teñirlos con tintes especiales ¿Qué muestran los reticulocitos y cuál es su designación en un análisis de sangre?

Los reticulocitos son eritrocitos jóvenes formados después de la pérdida de núcleos por normoblastos.

Un rasgo característico de los reticulocitos. es la presencia de una sustancia de malla granular, que se manifiesta con tinción supravital, es decir, sin fijación previa de las células.

Se muestra al microscopio electrónico que las estructuras de malla granular son los restos del retículo endoplásmico, los ribosomas y las mitocondrias que contienen ARN. En los reticulocitos, la síntesis de proteínas (globina), hemo, purinas, nucleótidos de pirimidina, fosfátidos y lípidos se lleva a cabo en pequeña medida, pero no se sintetiza ARN en ellos. En 2 días, el reticulocito permanece en el torrente sanguíneo, después de lo cual, a medida que disminuye el ARN, se convierte en un eritrocito maduro.

En frotis teñidos por métodos hematológicos convencionales, los reticulocitos de color rosa grisáceo son policromatofílicos, es decir, teñido con diferentes tintes.

Métodos para contar reticulocitos

Actualmente, se utiliza un método unificado para contar el número de reticulocitos después de teñirlos.

• azul de cresilo brillante,
• Azur I o
• Azur II directamente sobre vidrio o en un tubo de ensayo.

1. El principio del método

Identificación de la sustancia de malla granular de los eritrocitos cuando se tiñen con pinturas alcalinas con su posterior recuento en un frotis de sangre.

2. Reactivos:

a) solución saturada de azul de cresilo brillante en alcohol absoluto(para preparar alcohol absoluto, es necesario soportar etanol al 96% en varios cambios de polvo de sulfato de cobre calcinado): 1,2 g de pintura por 100 ml de alcohol;

b) solución azul I: azur I - 1 g, oxalato de amonio - 0,4 g, cloruro de sodio - 0,8 g, alcohol etílico 96% - 10 ml, agua destilada - 90 ml. La solución de pintura en un vial cerrado se coloca durante 2 a 3 días en un termostato a 37 °C y se agita vigorosamente periódicamente. Luego se enfrió a temperatura ambiente y se filtró a través de papel filtro. La solución se almacena en un recipiente de vidrio oscuro. Si aparece un precipitado, la pintura debe filtrarse nuevamente;

c) Solución Azura II: azur II - 1 g, citrato de sodio - 5 g, cloruro de sodio - 0,4 g, agua destilada - 45 ml. La solución se deja en un termostato a 37 °C durante 2 días, removiendo ocasionalmente. Para acelerar la disolución, la pintura se puede calentar a fuego lento durante 15 a 20 minutos sin que hierva. Enfriar a temperatura ambiente y filtrar. Almacenar en un recipiente de vidrio oscuro.

3. Colorear

Coloración sobre vidrio:

• un portaobjetos de vidrio bien lavado y desengrasado se calienta sobre la llama de un mechero. Con una varilla de vidrio se aplica sobre el vidrio una gota de uno de los colorantes y se prepara una mancha de pintura con vidrio pulido. Marque el lado del vidrio en el que se aplica la mancha de pintura con un lápiz de vidrio. De esta forma, el vidrio puede prepararse para uso futuro y almacenarse en un lugar seco y oscuro;
• se aplica una gota de sangre a los vasos preparados de esta manera, se hace una fina mancha y se coloca inmediatamente el vaso en una cámara húmeda. Para hacer esto, use una placa de Petri con tapa, en la cual se colocan rollos de gasa o algodón ligeramente humedecidos a lo largo de los bordes;
• los frotis se mantienen en una cámara húmeda durante 3-5 minutos y luego se secan al aire. La sustancia de malla granular de los reticulocitos se vuelve azul púrpura, destacando claramente sobre el fondo verdoso azulado de los eritrocitos.

Coloración in vitro:

• Método 1: antes de usar, prepare una solución de trabajo de azul de cresilo brillante en un tubo de ensayo por gota de solución de oxalato de potasio al 1% 4 gotas de solución de pintura 1. Agregue 40 µl de sangre a la pintura (dos pipetas hasta la marca de 0,02). Mezclar a fondo pero suavemente y dejar actuar durante 30 minutos. Mezclar y preparar trazos finos;
• método 2: Se colocan 0,05 ml de solución de colorante 3 y 0,2 ml de sangre en un tubo de ensayo. La mezcla se mezcla bien y se deja durante 20-30 minutos. Mezclar y preparar trazos finos;
• método 3: Se colocan 0,3–0,5 ml de solución de colorante 2 y 5–6 gotas de sangre en un tubo de ensayo con una pipeta del aparato de Panchenkov. El tubo se cierra con un tapón de goma, la mezcla se mezcla completa pero suavemente y se deja durante 1 a 1½ horas (los reticulocitos se tiñen mejor cuando se exponen durante 1½ horas a 3 horas). Mezclar y preparar trazos finos.

4. Recuento de reticulocitos

En los frotis, los eritrocitos se tiñen de color amarillento-verdoso, sustancia granular-filamentosa, azul o violeta azulado.

• Los frotis preparados por uno de los métodos anteriores se examinan al microscopio con una lente de inmersión;
• es necesario contar al menos 1000 eritrocitos y anotar entre ellos el número de eritrocitos que contienen una sustancia granular-filamentosa. Con frotis delgados uniformes, en los que los eritrocitos están dispuestos en una fila, se selecciona un campo de visión de este tipo, en el que hay, por ejemplo, 50 eritrocitos, y luego se calculan 20 campos de visión de este tipo;
• en la práctica, para una mayor precisión, se usa un ocular especial, en el que el campo de visión se puede reducir al tamaño requerido. En ausencia de un ocular ya hecho, se puede preparar fácilmente desatornillando el ocular ×7, colocando un trozo de papel con un pequeño cuadrado recortado y atornillándolo. El número de reticulocitos contados se expresa por 1000 o por 100 eritrocitos.

Contenido cuantitativo de reticulocitos

NORMA: 0.5–1.2% (30–70 × 10 9 / l)

Se observa un aumento en el número de reticulocitos con:

• pérdida de sangre (especialmente aguda);
• anemia hemolítica, especialmente durante una crisis (hasta 20-30%);
• en el contexto del tratamiento de la anemia megaloblástica con vitamina B12 (crisis de reticulocitos: un aumento en el número de reticulocitos en el día 4 al 8 de tratamiento).

Una disminución en el número de reticulocitos es típica de:

• anemias aplásicas e hipoplásicas;
• anemia megaloblástica no tratada;
• enfermedad por radiación;
• tomar medicamentos citotóxicos.

Las reseñas publicadas en este sitio son opiniones personales de las personas que las escribieron. ¡No te automediques!

Reticulocitos (importancia clínica y diagnóstico de laboratorio)

(1) reticulocitos que tienen un núcleo (eritronormoblastos), y su granularidad se localiza en forma de corola densa alrededor del núcleo;

(2) reticulocitos que tienen una sustancia reticulada granular en forma de bola o bulto;

(3) reticulocitos, que tienen una granularidad en forma de red densa;

(4) reticulocitos, que tienen una sustancia reticulada granular en forma de hilos individuales;

(5) reticulocitos que contienen gránulos individuales.

Con anemia hemolítica (el número de reticulocitos puede alcanzar hasta el 60% o más (aumentando especialmente durante las crisis hemolíticas);

En caso de pérdida de sangre aguda (durante 3-5 días después de la pérdida de sangre, se produce una crisis de reticulocitos), incluido un aumento de reticulocitos, permite sospechar un sangrado latente (por ejemplo, en pacientes con úlcera péptica del tracto gastrointestinal, fiebre tifoidea);

En el tratamiento de la anemia ferropénica con hierro (algunos días (3 - 10) después del inicio del tratamiento antianémico de la anemia perniciosa);

Con una aguda falta de oxígeno;

Con metástasis de tumores en la médula ósea.

forma anormal de hemoglobina;

Con anemias regenerativas aplásicas e hipoplásicas;

Con anemia causada por la falta de hierro, vitamina B12, ácido fólico (anemia microcítica-hipocrómica y megaloblástica);

Con anemia sideroblástica;

Con metástasis de cáncer al hueso;

Con enfermedad por radiación y radioterapia;

En el tratamiento de citostáticos;

Con enfermedades autoinmunes del sistema hematopoyético;

Con enfermedad renal;

Con recurrencia de la anemia de Addison-Birmer;

Elección incorrecta del anticoagulante o mezcla insuficiente de sangre con anticoagulante;

Apretón prolongado de la mano con un torniquete;

Recepción de sulfonamidas (son posibles resultados tanto subestimados como sobreestimados);

Transfusión de sangre poco antes del estudio;

Hemólisis de una muestra de sangre.

Evaluación de la actividad de la eritropoyesis en condiciones acompañadas de hemólisis o pérdida de sangre;

Evaluación de la capacidad de regeneración de la médula ósea después de la terapia citotóxica y el trasplante de médula ósea;

Evaluación de la restauración de la síntesis de eritropoyetina después del trasplante renal;

Control de dopaje en deportistas (toma de eritropoyetina);

Diagnóstico de hematopoyesis ineficaz o producción reducida de glóbulos rojos;

Diagnóstico diferencial de anemia;

Detección de una violación de la capacidad regenerativa de la médula ósea con deficiencia de hierro, vitaminas B12, B6, folato, cobre y seguimiento de la terapia adecuada;

Evaluación de la respuesta a la terapia con eritropoyetina, eritrosupresores.

Reticulocitos con bajo contenido de ARN, los más maduros (%LFR, fracciones de reticulocitos de baja fluorescencia, fracción de reticulocitos con baja fluorescencia);

Reticulocitos con un contenido promedio de ARN (MFR%, fracciones de reticulocitos de fluorescencia media) - una fracción de reticulocitos con fluorescencia media);

reticulocitos con un alto contenido de ARN (HFR%, fracciones de reticulocitos de alta fluorescencia) - una fracción de reticulocitos con alta fluorescencia);

Fracción de reticulocitos inmaduros (IRF%, fracción de reticulocitos inmaduros).

Recuento de reticulocitos en un frotis después de teñirlos con colorantes especiales

El recuento de reticulocitos en un frotis después de teñirlos con colorantes especiales es, en la práctica, el método más utilizado para contar el número de reticulocitos. Esto se debe al hecho de que el método es simple, bastante económico y no requiere un equipo costoso especial, por lo que puede usarse en cualquier laboratorio de diagnóstico clínico.

Principio del método

Identificación de la sustancia de malla granular de los reticulocitos con tinción supravital con colorantes alcalinos con su posterior recuento en un frotis de sangre.

reactivos

Puedes utilizar uno de los siguientes tintes:

1. Solución saturada de azul de cresilo brillante en alcohol absoluto (para preparar alcohol absoluto, es necesario soportar etanol al 96% en varios cambios de polvo de sulfato de cobre calcinado). Para 100 ml de alcohol absoluto, se toman 1,2 g de pintura.
2. Solución de Azure I: Azur I - 1 g, oxalato de amonio - 0,4 g, cloruro de sodio - 0,8 g, alcohol etílico 96% - 10 ml, agua destilada - 90 ml. La solución de pintura en una botella cerrada se coloca durante 2-3 días en un termostato a 37 ° C y se agita vigorosamente periódicamente. Luego se enfrió a temperatura ambiente y se filtró a través de papel filtro. La solución se almacena en un recipiente de vidrio oscuro. Si aparece un precipitado, la pintura debe filtrarse nuevamente.
3. Solución Azure II: Azur II - 1 g, citrato de sodio - 5 g, cloruro de sodio - 0,4 g, agua destilada - 45 ml. La solución se deja en un termostato a 37°C durante 2 días, removiendo ocasionalmente. Para acelerar la disolución, la pintura se puede calentar a fuego lento durante 15 a 20 minutos, sin que hierva. Enfriar a temperatura ambiente y filtrar. Almacenar en un recipiente de vidrio oscuro.

Equipamiento especial

Progreso de la definición

La tinción de reticulocitos se realiza en vidrio o en un tubo de ensayo.

Tinción de reticulocitos en vidrio

Cuando se tiñen reticulocitos en vidrio, se calienta sobre la llama de un mechero un portaobjetos de vidrio bien lavado y desengrasado. Se aplica una gota de uno de los colorantes enumerados anteriormente al vidrio con una varilla de vidrio y se prepara una mancha de pintura con vidrio esmerilado. Se utiliza un gráfico de vidrio para marcar el lado del vidrio sobre el que se aplica una mancha de pintura. De esta forma, el vidrio puede prepararse para uso futuro y almacenarse en un lugar seco y oscuro. Se prepara una cámara húmeda antes del análisis. Por lo general, para este propósito utilizan una placa de Petri con rollos de algodón humedecido o papel de filtro colocados a lo largo de los bordes. Se aplica una gota de sangre a una mancha de pintura, se prepara una mancha delgada y se coloca inmediatamente en una cámara húmeda durante 3-10 minutos. A continuación, los frotis se secan al aire.

Tinción de reticulocitos in vitro

La tinción de reticulocitos in vitro difiere cuando se utilizan diferentes colorantes.

Método 1: tinción de reticulocitos in vitro con azul de cresilo brillante.

Antes de usar, prepare una solución de trabajo de azul de cresilo brillante en un tubo de ensayo a base de una gota de solución de oxalato de potasio al 1% 4 gotas de solución de pintura de azul de cresilo brillante. Se añaden 0,04 ml de sangre a la pintura (dos pipetas hasta la marca de 0,02). La mezcla se mezcla completa pero suavemente y se deja durante 30 minutos. Luego mezcle nuevamente y prepare frotis finos.

Método 2: tinción de reticulocitos in vitro con azure II.

Coloque 0,05 ml de solución de colorante azul II y 0,2 ml de sangre en un tubo de ensayo. La mezcla se mezcla bien y se deja durante 20 a 30 minutos. Mezclar de nuevo y preparar frotis finos.

Método 3: tinción de reticulocitos in vitro con azul I.

Coloque 0,3 - 0,5 ml de solución de pintura azul I y 5 - 6 gotas de sangre con una pipeta del aparato Panchenkov en un tubo de ensayo. El tubo de ensayo se cierra con un tapón de goma, la mezcla se mezcla completa pero suavemente y se deja durante 1-1,5 horas (los reticulocitos se tiñen mejor con una exposición de 1,5-3 horas). Mezclar y preparar trazos finos.

Los tintes listos para usar para reticulocitos están actualmente disponibles comercialmente. La tinción de reticulocitos con su ayuda se lleva a cabo de acuerdo con las instrucciones adjuntas.

Recuento de reticulocitos.

Los frotis preparados por uno de los métodos anteriores se microscopian con una lente de inmersión. En el frotis, los reticulocitos y los eritrocitos se tiñen de color amarillo verdoso, la sustancia granular-filamentosa en los reticulocitos es azul (cuando se tiñe con azur II y azul de cresilo brillante) o azul violeta (cuando se tiñe con azur I).

Fotos de reticulocitos:

Encuentre campos de visión donde los eritrocitos se ubican por separado. En estos campos de visión, es necesario contar al menos 1000 eritrocitos y anotar entre ellos el número de eritrocitos que contienen una sustancia granular-filamentosa. Se obtiene mayor precisión al contar 2000 - 3000 eritrocitos.

Debido al hecho de que una gran cantidad de eritrocitos se encuentra en el campo de visión, lo que dificulta el recuento, es necesario limitar (reducir) el campo de visión. Para hacer esto, puede usar un ocular especial, en el que puede reducir el campo de visión al tamaño requerido, o usar una "ventana" especial (un círculo con un diámetro ligeramente más pequeño que el ocular se corta en papel, se corta un pequeño rombo en el centro del círculo y la ventana resultante se inserta en el ocular).

El número de reticulocitos contados se expresa por 100 (en porcentaje) o por 1000 (en ppm) de eritrocitos.

Ejemplo: Al contar 1000 eritrocitos en un frotis, se reveló que 15 de cada 1000 eritrocitos tienen una sustancia de malla granular de un grado u otro, es decir, son reticulocitos. Por tanto, el número de reticulocitos en este caso es del 1,5% o 15‰.

Literatura:

• Manual "Métodos de investigación de laboratorio en la clínica" editado por Menshikov V.V. - Moscú, "Medicina", 1987
• Lyubina A. Ya., Ilyicheva L. P. y coautores - "Estudios de laboratorio clínico" - Moscú, "Medicina", 1984

Contar el número de reticulocitos usando microscopía fluorescente

El método de recuento del número de reticulocitos mediante microscopía de fluorescencia es sencillo y requiere poco tiempo, más preciso que el método convencional, ya que la microscopía de fluorescencia revela los granos más pequeños de la sustancia reticular-filamentosa.

reticulocitos

Los reticulocitos son glóbulos rojos jóvenes formados después de la pérdida de núcleos por los normoblastos. Un rasgo característico de los reticulocitos es la presencia en su citoplasma de una sustancia granular-filamentosa (retículo), que representa agregados de ribosomas y mitocondrias.

Inclusiones patológicas en eritrocitos

Los cuerpos de Jolly (cuerpos de Howell-Jolly) son pequeñas inclusiones redondas de color rojo violeta con un tamaño de µm, que se encuentran 1 (raramente 2-3) en un eritrocito. Son los restos del núcleo tras la extracción de sus RES. Se detectan con hemólisis intensa y "sobrecarga" de RES, después de esplenectomía, con anemia megaloblástica.

Estudio citoquímico de lípidos

El estudio citoquímico de los lípidos se basa en el uso de colorantes que se disuelven en las grasas (Sudán III, Sudán IV, Sudán negro, etc.). Para identificar la grasa neutra se utiliza Sudán III, que tiñe la grasa de naranja. Los lipoides se detectan mejor con negro de Sudán (tinción negra).

Análisis de orina según Nechiporenko

El método Nechiporenko en el diagnóstico de laboratorio doméstico es el método más común para la determinación cuantitativa de elementos formes en la orina. Este método es el más simple, accesible para cualquier laboratorio y conveniente en la práctica ambulatoria, y también tiene una serie de ventajas sobre otros métodos cuantitativos conocidos para estudiar el sedimento de orina. Según el método de Nechiporenko, la cantidad de elementos formados (eritrocitos, leucocitos y cilindros) se determina en 1 ml de orina.

©18 Diagnóstico de laboratorio

Reticulocitos: ¿qué es en un análisis de sangre? Indicadores de normas y designación.

Un reticulocito es un precursor de un eritrocito, es decir, es un eritrocito en forma joven. En la sangre de una persona sana, su contenido es del 0,2 al 1,2%. Esta relación refleja el contenido de reticulocitos en la sangre en relación con los eritrocitos. Maduran 4-5 días.

Conceptos básicos

Un rasgo característico de las formas jóvenes de eritrocitos es que hay una sustancia granular-filamentosa en el citoplasma, que es un ribosoma y mitocondrias agregados. Esta sustancia se puede detectar utilizando un método especial para teñir frotis de sangre. Esta tinción de reticulocitos se denomina supravital, es decir, se produce sin fijación previa de las células.

Grupos de reticulocitos

En total, los expertos distinguen cinco grupos principales de reticulocitos. Se diferencian en el retículo reticular. Su densidad y edad están en proporción inversa: cuanto más gruesa es la malla, más jóvenes son. Averigüemos cuál es el reticulocito más joven.

Esta es una celda que tiene una malla en forma de bola gruesa. Estas células pertenecen al primer grupo. Los reticulocitos de una forma más madura aparecen como una sustancia que tiene una malla claramente distinguible. En los grupos cuarto y quinto, está representado por hilos y granos individuales. Muy a menudo, la sangre de personas sanas contiene reticulocitos de estos últimos grupos, es decir, más maduros. Por regla general, constituyen alrededor del 80% del resto. Con una regeneración mejorada, que es característica de algunas patologías, aumenta el número de reticulocitos de los primeros tres grupos. Estas patologías incluyen:

Crisis de reticulocitos que acompaña a la anemia por deficiencia de B12.

Funciones que realizan los reticulocitos

Un reticulocito es también un eritrocito. Se caracteriza por la misma función que para los eritrocitos. Es decir, las células también transfieren moléculas de oxígeno a diferentes tejidos y órganos, pero la eficiencia de este proceso es mucho menor que cuando los eritrocitos maduros transfieren oxígeno. Los reticulocitos pueden adsorber moléculas de hierro contenidas en la hemoglobina. Esto es posible debido a los receptores sensibles a la transferrina. ¿Por qué se realiza un recuento de reticulocitos? Más sobre esto más adelante.

Mecanismo de muestreo de sangre

Se toma una muestra de sangre para determinar este indicador como parte de un análisis general. Si es necesario determinar el nivel de reticulocitos, el médico que recetó el análisis indica en la dirección la necesidad de un conteo adicional.

Este análisis no necesita una preparación especial, pero tradicionalmente se toma con el estómago vacío por la mañana. Al mismo tiempo, si es necesario, se puede entregar en cualquier momento del día. La sangre para el análisis debe tomarse de un dedo, su estudio se lleva a cabo en el laboratorio, en el departamento de hematología.

El recuento del número de reticulocitos se lleva a cabo en un frotis teñido supravital. Se utiliza el método microscópico, es decir, simplemente se cuenta su número colocando una muestra de sangre bajo un microscopio. Hasta la fecha, existe un método de hardware para contar. Es utilizado por los laboratorios modernos.

La designación de reticulocitos en un análisis de sangre es RET.

Realización de un análisis

Existen varios métodos para realizar un estudio de este tipo:

• El vidrio se lava, se seca y se calienta con un quemador especial. Luego, se le aplica uno de los tres tintes, luego se agrega una gota de sangre, después de lo cual se hace una mancha delgada. El vidrio se coloca en una placa de Petri u otra cámara durante un cierto tiempo, luego se seca al aire libre.
• Si se usa un tubo de ensayo, se le coloca una sustancia colorante y se le agrega una gota de sangre. La mezcla debe ser agitada. Tiempo de espera: de 20 minutos a 3 horas, depende del reactivo que se utilice. Luego mezcle nuevamente el líquido que está en el tubo de ensayo, se toman frotis de él.

Es difícil decir qué método determina resultados más precisos. Ambos son buenos a su manera, pero el médico puede considerar necesario llevar a cabo el análisis de cierta manera, entonces debe señalarlo en la dirección.

Indicadores

Al calcular el nivel de reticulocitos, las diferencias de género en la norma importan solo después de 12 años. Hasta esta edad, la norma en niños de ambos sexos es la misma. Alrededor de la edad de aproximadamente un año, las niñas comienzan la menstruación, que es regular. Como resultado de la pérdida mensual de sangre, se amplía el rango de fluctuaciones en las células eritroides.

1. En los recién nacidos, la norma está en el rango de 0,15 a 1,5%.

2. En niños de dos semanas: del 0,45 al 2,0%.

3. En niños de uno a dos meses: del 0,25 al 0,95%.

4. En niños de seis meses: del 0,2 al 1,0%.

5. En niños de dos a seis años: del 0,25 al 0,75%.

6. En niños de seis a doce años: del 0,25 al 1,3%.

7. En hombres mayores de doce años, del 0,25 al 1,7%.

8. En mujeres mayores de doce años: del 0,12 al 2,1%.

¿Qué significa la situación cuando aumentan los reticulocitos?

Un aumento en el número de reticulocitos en la sangre.

Con anemia de varias etimologías, la determinación del número de reticulocitos juega un papel especial. Si su contenido aumenta en la sangre, esta patología se llama reticulocitosis. Si el aumento va acompañado de un aumento en el nivel de hemoglobina, esto indica que la médula ósea tiene una buena capacidad de regeneración. Esto puede suceder si los siguientes factores están presentes:

Anemia hemolítica de varias etimologías. Es una serie de enfermedades que se caracterizan por la destrucción de los glóbulos rojos. Este fenómeno se llama hemólisis. En este caso, el contenido de reticulocitos en la sangre puede alcanzar el 60%. Si se presenta una crisis hemolítica, esta cifra puede agudizarse.

Envenenamiento por hemotoxina que causa hemólisis. Las hemotoxinas incluyen veneno de víbora y algunos medicamentos que se usan para tratar la eritremia. Las toxinas de la malaria también son capaces de causar hemólisis.

Tratamiento con levodopa para la enfermedad de Parkinson.

Uso a largo plazo de ciertos medicamentos antiinflamatorios y antipiréticos.

Terapia con el fármaco "Eritropoyetina" enfermedades anémicas.

Metástasis en la médula ósea.

El período de recuperación después de la radiación o la terapia química.

La reticulocitosis puede ser falsa y verdadera.

¿Por qué hacerse una prueba de reticulocitos? Esta pregunta se hace a menudo.

Reticulocitosis falsa y verdadera

La reticulocitosis verdadera se caracteriza por un aumento en el número de reticulocitos jóvenes en la sangre, que se acompaña de un aumento en su número en la médula ósea.

La falsa reticulocitosis se caracteriza por un aumento del número de reticulocitos exclusivamente en la sangre periférica, mientras que en la médula ósea su nivel permanece normal o ligeramente reducido.

Tarifas reducidas

El proceso de reducción del número de reticulocitos se observa con la inhibición de la eritropoyesis. Ocurre como resultado de los siguientes factores:

Uso a largo plazo de sulfonamidas.

Tomar ciertos medicamentos, como cloranfenicol o carbamazepina.

Enfermedades infecciosas crónicas.

Algunas enfermedades renales graves que afectan a la eritropoyesis.

Mixedema u otra disfunción tiroidea.

Tumores en la médula ósea.

Examinamos qué es un reticulocito. Este es un glóbulo rojo joven en la sangre humana.

Las razones del aumento de reticulocitos, ¿cómo determinar la funcionalidad del sistema hematopoyético?

A veces, cuando se prescribe un examen clínico, un análisis de sangre general puede indicar por separado RTC o RET, abreviaturas que muestran el contenido de reticulocitos. Son células no nucleadas que preceden a los eritrocitos (glóbulos rojos) durante su formación. Los reticulocitos en el análisis de sangre, su número y proporción con los eritrocitos reflejan el estado y la funcionalidad reproductiva de la médula ósea, así como todo el sistema hematopoyético.

Certificado médico

Puedes definir en detalle qué son los reticulocitos así: son células redondas o en forma de estrella que se forman en la médula ósea y se transforman en glóbulos rojos bajo la influencia de la hormona glicoproteica eritropoyetina.

El color de los reticulocitos suele ser rosa con un tinte azul. Su característica distintiva de la forma posterior es la presencia en la estructura de ARN residual, mitocondrias y otros orgánulos que parecen formaciones granulares y filamentosas, cuya pérdida indica la transformación en una célula madura.

Los deberes funcionales de los reticulocitos coinciden con los eritrocitos: transportar oxígeno, pero con mucha menos eficiencia debido al bajo contenido de hemoglobina en ellos. Se concentran principalmente en la médula ósea roja, huesos planos y tubulares, y solo los glóbulos rojos maduros ingresan al torrente sanguíneo. Pero también se permite una pequeña fracción de reticulocitos inmaduros en el torrente sanguíneo periférico, lo que indica la activación del proceso de producción de eritrocitos (eritropoyesis).

El proceso de formación de la sangre.

La eritropoyesis comienza con la transformación de un eritroblasto, una célula que contiene un núcleo pero no hemoglobina, en un pronormblasto. Además, en la serie eritroide, se forma un eritroblasto basófilo, que ya tiene las características de la hemoglobinización.

A medida que los eritrocitos ancestrales acumulan la sustancia retenedora de oxígeno (hemoglobina), la célula pasa por las etapas de normoblasto policromatofílico y luego oxifílico. Durante este período, el núcleo aún se conserva, cuya involución conduce a la formación de un eritrocito directamente joven: un reticulocito, que ya tiene la capacidad de retener y transportar oxígeno y dióxido de carbono.

Los glóbulos rojos jóvenes permanecen en el lugar de su formación hasta 40 horas, después de lo cual una pequeña parte de ellos, bajo la influencia de la eritropoyetina, ingresa a los vasos sanguíneos, donde se mueve libremente durante 1,5 o 2 días. Durante este tiempo, la célula pierde el retículo (formaciones filamentosas residuales) y se convierte en un eritrocito.

Etapas de desarrollo de los reticulocitos.

En la sangre, los reticulocitos pasan por cinco etapas de maduración a medida que el retículo involuciona:

1. etapa cero: cuando la sustancia basófila (sustancia intracelular reticulada) tiene la forma de un núcleo, es decir, la acumulación de granularidad parece una especie de corola;
2. la primera etapa: la sustancia basófila (BS) adquiere una estructura de malla en forma de bola;
3. la segunda etapa: la red granular se distribuye uniformemente en la celda;
4. la tercera etapa - BV parece hilos separados;
5. Cuarta etapa: la BV se distribuye en forma de pequeños granos a lo largo de la periferia de la célula.

En un cuerpo sano, los reticulocitos en el torrente sanguíneo deben ocurrir solo en las etapas III y IV de maduración (80 por ciento) y 0 - II - en copias individuales. Pero la muerte excesiva de glóbulos rojos o la falta de oxígeno estimulan una mayor producción de eritropoyetina por parte de los riñones, lo que conduce a la liberación de células inmaduras de todas las etapas e incluso normoblastos en los vasos.

Análisis de sangre para reticulocitos.

Un recuento de reticulocitos en un frotis de sangre no es obligatorio para el examen hematológico, pero es parte de la evaluación clínica general. Solo cuando surgen ciertas sospechas, el médico hace una designación especial en el análisis.

Razones para el estudio

Las razones para analizar la cantidad de RTC en la sangre son para verificar el trabajo de la médula ósea y los riñones en la producción de células sanguíneas y eritropoyetina en tales casos:

• con sospecha de anemia de diversos orígenes;
• si es necesario, control de la terapia con medicamentos para la deficiencia de hierro, vitamina B12 y ácido fólico;
• para monitorear cuando se toman medicamentos que contienen eritropoyetina, eritrosupresores;
• con sangrado externo severo o sospecha de interno;
• debido a la necesidad de tomar medicamentos que neutralicen las toxinas como resultado de las picaduras de insectos o serpientes venenosas;
• para controlar la producción de glóbulos rojos durante el trasplante de médula ósea o riñón;
• para la definición de cáncer.

El último punto está relacionado con las peculiaridades de la metástasis de algunos tumores cancerosos en los órganos hematopoyéticos.

Método de detección

Si se pierde el núcleo, solo se pueden aplicar tintes ácidos a las células sanguíneas. Al teñir en un frotis de sangre, se indican elementos de la serie eritroide, que luego se detectan mediante microscopía óptica. Para aislar los reticulocitos de la masa total de eritrocitos, es necesario usar preparaciones especiales que cambien el color de la estructura granular de las células.

El proceso de detección en sí consiste en mezclar plasma sanguíneo con colorante azul de cresilo brillante o naranja de acridina in vitro (in vitro) o sobre vidrio en proporciones: 1 parte de sangre por 10 partes de la sustancia.

Los métodos en vidrio e in vitro son fundamentalmente diferentes. En el primer caso, los frotis de sangre mezclados con colorante se sumergen en un ambiente húmedo durante 10 minutos, después de lo cual se secan y se cuentan las células bajo un microscopio. En la segunda variante, la composición mezclada en el tubo de ensayo se deja hasta 3 horas, luego se vuelve a mezclar, se unta y se cuenta.

Cuando las células estrelladas de los reticulocitos se hacen visibles y se determina su grado de madurez (según la estructura de la BV teñida), se puede obtener información sobre el estado de la médula ósea.

Indicadores permitidos

El nivel normal de reticulocitos corresponde al proceso de formación de sangre en un cuerpo sano. Para organizar los datos, se utiliza una tabla especial, en la que los rangos normales se clasifican por edad y género de una persona.

La norma de reticulocitos en la sangre en niños.

La norma de los reticulocitos en los niños varía según el período específico de formación del sistema hematopoyético. Entonces, en recién nacidos de hasta 14 días, la tasa aceptable es de 0,15 a 1,5 por ciento en relación con los glóbulos rojos. Los valores normales para bebés de hasta dos meses son del 0,45 al 2,1 por ciento, y hasta los seis meses, del 0,25 al 0,9 por ciento. En un niño de seis meses a un año se consideran saludables valores del 0,2 al 1 por ciento, y se estabilizan hasta los seis años. Además, el rango se estrecha: de 7 a 12 años, oscila entre 0,2 y 1,3 por ciento.

Reticulocitos en la sangre en adultos.

El contenido adicional permitido de reticulocitos en la sangre depende más del sexo del niño que de la edad, y corresponde a los índices de adultos. Esto se debe al inicio del ciclo menstrual en las niñas, lo que implica una pérdida de sangre mensual y, en consecuencia, un aumento en la producción de células sanguíneas durante este período. Indicadores normativos:

• el nivel aceptable de glóbulos rojos jóvenes en la sangre de mujeres y niñas a partir de los 13 años será de 0,12 a 2,05 por ciento (de 1,2 a 20 ppm, respectivamente);
• el número de reticulocitos en los hombres normalmente oscila entre el 0,24 y el 1,7 por ciento de la masa eritroide total.

Entonces, en un adulto, se establece un rango constante de concentración permisible de células sanguíneas jóvenes, que contienen una sustancia de malla granular. Al mismo tiempo, el aumento de reculocitos o una crisis de reticulocitos indican ciertos trastornos en el funcionamiento del sistema hematopoyético.

Aumento de reticulocitos

Los reticulocitos elevados (o de otro modo la reticulocitosis) pueden ser tanto positivos como negativos para el sujeto. Se produce un aumento del número de células sanguíneas inmaduras en casos de:

• Con resultados positivos de la terapia con preparaciones que contienen hierro, vitamina B12 y ácido fólico, que generalmente ocurren después de una semana.
• Al reponer el volumen de sangre después de una pérdida significativa de sangre.
• Con resultados positivos en el tratamiento de enfermedades oncológicas mediante fármacos anticancerígenos o radioterapia.

¡Importante! La reticulocitosis se observa con deficiencia de oxígeno a una altura considerable sobre el nivel del mar.

Los valores negativos de la reticulocitosis incluyen:

• Consecuencias de enfermedades como la fiebre tifoidea, que provocan hemorragias internas.
• Los reticulocitos aumentan durante la intoxicación con venenos químicos o agentes extraños.
• La falsa reticulocitosis muestra la presencia de células inmaduras en la sangre en ausencia de ellas en la médula ósea, lo que indica procesos inflamatorios o metástasis en el órgano.
• La reticulocitosis se observa en el paludismo, la anemia hemolítica o la talasemia.

Un mayor contenido de glóbulos inmaduros en la sangre (reticulocitosis) está plagado de espesamiento, que posteriormente puede provocar trombosis, ataque cardíaco o accidente cerebrovascular.

Reticulocitos en la sangre durante el embarazo.

En mujeres embarazadas, el volumen total de sangre aumenta debido al plasma, por lo tanto, se observa su dilución y una disminución en el nivel de glóbulos rojos. Debido al hecho de que no hay suficiente hemoglobina en la sangre, se desarrolla anemia, lo que activa el proceso de eritropoyesis. Por lo tanto, se determina un alto porcentaje de reticulocitos en mujeres embarazadas. La clínica de este fenómeno cumple la norma con la adaptación fisiológica del cuerpo para tener un hijo.

Los reticulocitos se reducen

La reticulocitopenia (cuando se reduce el nivel de reticulocitos) a menudo indica daño en los riñones y/o la médula ósea. Los factores que reducen el contenido de eritrocitos jóvenes son:

• Anemia provocada por la falta de ácido fólico, vitamina B12 o hierro, que conduce a la destrucción de los glóbulos rojos.
• Enfermedades renales, pero pueden disminuir ligeramente el nivel de reticulocitos.
• Abuso de alcohol, que mostrará una disminución de RTC debido a la inhibición de las funciones renales, supresión de la médula ósea y destrucción directa de células como resultado de la intoxicación.

¡Importante! Los tumores malignos también pueden disminuir el nivel de reticulocitos en la sangre. Depende de la zona de la médula ósea donde haya hecho metástasis el cáncer.

Por sí mismo, el indicador del contenido de reticulocitos en la sangre no es un diagnóstico. Con una desviación significativa del rango permitido, establece la dirección general para el diagnóstico.

Determinación del número de reticulocitos- un análisis de sangre clínico, en el que se cuentan los glóbulos rojos jóvenes producidos por la médula ósea. El estudio complementa el análisis de sangre general. El recuento de reticulocitos se realiza para el diagnóstico diferencial de varios tipos de anemia, la evaluación del funcionamiento de la médula ósea y el bazo, el seguimiento de las condiciones de los pacientes con deficiencia de hierro, deficiencia de vitamina B12 o ácido fólico, insuficiencia renal y cáncer. El muestreo de sangre para la investigación se realiza a partir de una vena o capilares. El recuento de reticulocitos se determina utilizando el método de citometría de flujo. Los valores de referencia para hombres son 23-70 mil / l, para mujeres: 17-63,8 mil / l. Los plazos del análisis no superan 1 día hábil.

Los reticulocitos son los precursores de los eritrocitos. Son producidos por la médula ósea durante la diferenciación y división de las células madre. La mayoría de los reticulocitos se encuentran en la médula ósea; los eritrocitos ya maduros ingresan principalmente al torrente sanguíneo. La proporción de reticulocitos en la sangre es de aproximadamente 0,5-2%. Al realizar el análisis, se determina el número de células de este tipo y su porcentaje del número total de glóbulos rojos. Los resultados nos permiten evaluar la producción de glóbulos rojos en la médula ósea, para identificar el grado de actividad de este proceso.

El cuerpo mantiene un nivel estable de glóbulos rojos en la sangre. Con una disminución en su número como resultado de hemólisis, alteración de la síntesis y sangrado, se activan los mecanismos compensatorios para restaurar las concentraciones normales. Cambiando el nivel y porcentaje de reticulocitos, se puede establecer un aumento en la producción de glóbulos rojos en la médula ósea o una inhibición de este proceso. Si la médula ósea funciona normalmente, la pérdida de glóbulos rojos conduce a un aumento posterior en su número y en el número de reticulocitos. Se produce una disminución en el nivel de estos tipos de células cuando la médula ósea roja está dañada por un tumor, metástasis, radioterapia y quimioterapia. Para el análisis de reticulocitos, el biomaterial es sangre capilar o venosa. El estudio se realiza mediante un analizador hematológico por citometría de flujo. Los resultados se utilizan en la práctica terapéutica general, en hematología, pediatría, enfermedades infecciosas y cirugía.

Indicaciones

La prueba de reticulocitos se usa para evaluar la producción de glóbulos rojos por parte de la médula ósea. Los resultados del estudio nos permiten diferenciar diferentes tipos de anemia. Según el nivel de reticulocitos, se dividen en hiporegenerativos y regenerativos. En el primer caso, los parámetros de la prueba se reducen, la producción de glóbulos rojos es insuficiente y las funciones de la médula ósea se reducen. Este grupo incluye anemia hemolítica en enfermedades crónicas, intoxicación general, caquexia, deficiencia de proteínas, hierro, vitaminas. La anemia regenerativa se acompaña de un aumento compensatorio en el nivel de reticulocitos en el contexto de una mayor destrucción o pérdida de eritrocitos. Este grupo incluye anemias posthemorrágicas y algunas hemolíticas. El análisis de reticulocitos se puede utilizar para determinar la gravedad de la anemia, luego sus resultados se complementan con indicadores del nivel de eritrocitos, hemoglobina e índices de eritrocitos.

La determinación del nivel de reticulocitos está indicada con un nivel reducido de glóbulos rojos, hemoglobina, con quejas de fatiga frecuente, dolores de cabeza, dificultad para respirar, sangre en la orina o heces. Con un diagnóstico establecido de anemia, se prescribe un análisis para evaluar la efectividad del tratamiento. Especialmente a menudo se usa para controlar la anemia causada por la deficiencia de hierro, vitamina B12 o ácido fólico, así como para desarrollar enfermedades crónicas en el contexto de insuficiencia renal. Para evaluar la función de la médula ósea, está indicada una prueba de reticulocitos para recuentos elevados de glóbulos rojos para determinar la causa de la policitemia.

Una prueba de reticulocitos en sangre no se usa para hacer un diagnóstico. Su objetivo principal en la práctica clínica es planificar procedimientos de diagnóstico posteriores y controlar el éxito de la terapia. La cantidad de reticulocitos en la sangre es relativamente estable, por lo tanto, con una disminución en el nivel de eritrocitos y hematocrito, los indicadores de análisis se vuelven artificialmente altos. Esto se puede evitar calculando el índice de reticulocitos, el número absoluto de reticulocitos (el porcentaje de reticulocitos multiplicado por el índice de hematocrito). Otra característica de este estudio es que los resultados indican una actividad reciente de la médula ósea, ya que los glóbulos rojos inmaduros circulan en la sangre durante 2 días.

Preparación para análisis y recogida de material.

Se recomienda tomar sangre para análisis de reticulocitos por la mañana, con el estómago vacío. El intervalo mínimo entre una comida y el procedimiento es de 3-4 horas. Al menos con un día de anticipación, es necesario abandonar el esfuerzo físico intenso, el consumo de alcohol y evitar la exposición a factores de estrés. Al prescribir un análisis, vale la pena informar al médico sobre los medicamentos utilizados, ya que algunos medicamentos afectan el nivel de reticulocitos en la sangre. 30 minutos antes del procedimiento de muestreo, debe dejar de fumar, excluir el estrés físico y emocional.

El nivel de reticulocitos se determina en sangre capilar o venosa. En consecuencia, la cerca está hecha del dedo anular o de la vena cubital. La sangre se coloca en un tubo de ensayo con un anticoagulante y se envía al laboratorio. Actualmente, los analizadores de hematología se utilizan en casi todas partes para contar reticulocitos. El estudio se realiza mediante citometría de flujo: las células en una corriente de fluido se mueven a través de un capilar muy estrecho y se tienen en cuenta durante la irradiación con láser. Plazos de ejecución del análisis - 1 día.

Valores normales

Los resultados del análisis de reticulocitos muestran el número absoluto de células por unidad de volumen de sangre y el porcentaje del número total de eritrocitos. Normalmente, en pacientes femeninas, el nivel de reticulocitos varía de 17 * 109 a 63,8 * 109 células / l, en pacientes masculinos, de 23 * 109 a 70 * 109 células / l. La proporción de células de este tipo en el número total de eritrocitos cambia con la edad:

• desde el nacimiento hasta las 2 semanas, del 0,15 al 1,5%;
• de 2 semanas a 1 mes - de 0,45 a 1,4%;
• de 2 a 6 meses - de 0,25 a 0,9%;
• de 6 meses a 2 años - de 0,2 a 1%;
• de 2 a 6 años - de 0,2 a 0,7%;
• de 6 a 12 años - de 0,2 a 1,3%;
• de 12 a 18 años: de 0,12 a 2,05% para niñas, de 0,24 a 1,7% para niños;
• a partir de 18 años: del 0,59 al 2,07% para mujeres, del 0,67 al 1,92% para hombres.

Se produce un aumento fisiológico en el nivel de reticulocitos en la sangre durante la falta de oxígeno causada por subir a una gran altura o descender bajo el agua, permanecer durante mucho tiempo en una habitación sin ventilación, fumar y beber alcohol. Además, a veces se determina un aumento en la concentración de estas células en mujeres embarazadas y se considera como una variante de la norma.

Elevar a mismo nivel

La causa de un aumento en el nivel de reticulocitos en la sangre puede ser una hemorragia. La concentración de eritrocitos disminuye para restaurarla, la médula ósea aumenta la producción de sus precursores. En el sangrado agudo, el número de reticulocitos aumenta al tercer o cuarto día, en el sangrado crónico se mantiene constantemente elevado todo el tiempo. En enfermedades acompañadas de hemólisis (destrucción de glóbulos rojos), el recuento de reticulocitos supera significativamente la norma, a veces las desviaciones alcanzan el 300%. Las patologías más comunes de este grupo son los defectos hereditarios en los eritrocitos, su destrucción autoinmune y el daño tóxico en la malaria. Otras razones para un aumento en el nivel de reticulocitos pueden ser policitemia, procesos inflamatorios, cáncer de médula ósea o la propagación de metástasis, restauración de la función de la médula ósea después de la radiación y la quimioterapia. En el tratamiento de la anemia, la normalización de la concentración de reticulocitos indica el éxito de las medidas terapéuticas.

Reducción de nivel

El motivo de la disminución del nivel de reticulocitos en la sangre puede ser la anemia causada por una deficiencia de hierro, vitamina B12 o ácido fólico. En tales casos, la producción de células sanguíneas se reduce debido a la falta de "material de construcción". Otra razón para la disminución del nivel de reticulocitos es la anemia que se desarrolla en el contexto de lesiones de la médula ósea o inhibición de sus funciones. Los cambios de este tipo se determinan con intoxicación por alcohol, disminución de la actividad de la glándula tiroides, infecciones crónicas, patologías autoinmunes, enfermedades renales, exposición a sustancias tóxicas, incluidas las drogas, radiación.

Tratamiento de las desviaciones de la norma.

En la práctica clínica, la prueba de reticulocitos se prescribe con mayor frecuencia después de un hemograma completo con una disminución de los glóbulos rojos y la hemoglobina. El nivel de reticulocitos le permite evaluar las funciones de la médula ósea, la síntesis de glóbulos rojos, determinar el tipo de anemia y monitorear la efectividad de su tratamiento. Si los resultados del estudio se desvían de lo normal, debe buscar el consejo de su médico: un médico general, pediatra, hematólogo, cirujano. Para evitar la influencia de factores fisiológicos en la cantidad de reticulocitos, es necesario excluir situaciones que causen falta de oxígeno: subir a una altura o descender bajo el agua, exposición prolongada a una habitación gaseada o mal ventilada, fumar, beber alcohol.

Las reseñas publicadas en este sitio son opiniones personales de las personas que las escribieron. ¡No te automediques!

Reticulocitos (importancia clínica y diagnóstico de laboratorio)

(1) reticulocitos que tienen un núcleo (eritronormoblastos), y su granularidad se localiza en forma de corola densa alrededor del núcleo;

(2) reticulocitos que tienen una sustancia reticulada granular en forma de bola o bulto;

(3) reticulocitos, que tienen una granularidad en forma de red densa;

(4) reticulocitos, que tienen una sustancia reticulada granular en forma de hilos individuales;

(5) reticulocitos que contienen gránulos individuales.

Con anemia hemolítica (el número de reticulocitos puede alcanzar hasta el 60% o más (aumentando especialmente durante las crisis hemolíticas);

En caso de pérdida de sangre aguda (durante 3-5 días después de la pérdida de sangre, se produce una crisis de reticulocitos), incluido un aumento de reticulocitos, permite sospechar un sangrado latente (por ejemplo, en pacientes con úlcera péptica del tracto gastrointestinal, fiebre tifoidea);

En el tratamiento de la anemia ferropénica con hierro (algunos días (3 - 10) después del inicio del tratamiento antianémico de la anemia perniciosa);

Con una aguda falta de oxígeno;

Con metástasis de tumores en la médula ósea.

forma anormal de hemoglobina;

Con anemias regenerativas aplásicas e hipoplásicas;

Con anemia causada por la falta de hierro, vitamina B12, ácido fólico (anemia microcítica-hipocrómica y megaloblástica);

Con anemia sideroblástica;

Con metástasis de cáncer al hueso;

Con enfermedad por radiación y radioterapia;

En el tratamiento de citostáticos;

Con enfermedades autoinmunes del sistema hematopoyético;

Con enfermedad renal;

Con recurrencia de la anemia de Addison-Birmer;

Elección incorrecta del anticoagulante o mezcla insuficiente de sangre con anticoagulante;

Apretón prolongado de la mano con un torniquete;

Recepción de sulfonamidas (son posibles resultados tanto subestimados como sobreestimados);

Transfusión de sangre poco antes del estudio;

Hemólisis de una muestra de sangre.

Evaluación de la actividad de la eritropoyesis en condiciones acompañadas de hemólisis o pérdida de sangre;

Evaluación de la capacidad de regeneración de la médula ósea después de la terapia citotóxica y el trasplante de médula ósea;

Evaluación de la restauración de la síntesis de eritropoyetina después del trasplante renal;

Control de dopaje en deportistas (toma de eritropoyetina);

Detección de una violación de la capacidad regenerativa de la médula ósea con deficiencia de hierro, vitaminas B12, B6, folato, cobre y seguimiento de la terapia adecuada;

Evaluación de la respuesta a la terapia con eritropoyetina, eritrosupresores.

Reticulocitos con bajo contenido de ARN, los más maduros (%LFR, fracciones de reticulocitos de baja fluorescencia, fracción de reticulocitos con baja fluorescencia);

Reticulocitos con un contenido promedio de ARN (MFR%, fracciones de reticulocitos de fluorescencia media) - una fracción de reticulocitos con fluorescencia media);

reticulocitos con un alto contenido de ARN (HFR%, fracciones de reticulocitos de alta fluorescencia) - una fracción de reticulocitos con alta fluorescencia);

Reticulocitos: qué es, normas para niños y adultos, alto y bajo, papel en el cuerpo.

En un análisis de sangre general, a menudo se puede encontrar una designación de células como RET - reticulocitos. En el pleno sentido de la palabra, no son células, ya que no tienen núcleo, exactamente como los eritrocitos maduros. Mientras tanto, la definición de estas formas no está incluida en la lista de indicadores obligatorios de un estudio hematológico. Si el médico lo necesita, enfatiza por separado los parámetros que le interesan. Por supuesto, las personas que han tenido la oportunidad de realizar un análisis de este tipo quieren saber: qué tipo de células son, reticulocitos, y por qué se tratan de manera tan ambigua.

¿Quiénes son y cuántos hay?

Los reticulocitos son eritrocitos "recién creados" que acaban de salir de la médula ósea.

La tasa de reticulocitos en la sangre periférica de un adulto apenas supera el 1% (según varios autores, de 0,8 - 1,3 a 0,2 - 2%). En los niños que acaban de nacer, la norma puede ser del 10%, pero a medida que el bebé crece y se desarrolla, los indicadores comienzan a disminuir y a las dos semanas de vida están lo más cerca posible de los valores normales de los adultos. .

En general, la eritropoyesis neonatal es un tema aparte: un análisis realizado 12 horas después del nacimiento muestra un marcado aumento en el nivel de hemoglobina (hasta 200 g/l), eritrocitos (hasta 6,0 x/l y más) y reticulocitos. Este cuadro de sangre se observa durante varios días, luego estos indicadores comienzan a caer, lo que se asocia con una disminución en la producción de eritropoyetina. Después de dos semanas, un mes, la producción de eritropoyetina aumenta nuevamente, lo que conduce a un aumento en el nivel de reticulocitos y la eritropoyesis se normaliza (en un niño de seis meses, las normas ya difieren poco de las de los adultos). En este sentido, me gustaría llamar la atención del lector sobre la designación de unidades para medir el número de reticulocitos, su contenido también se puede expresar en ppm, luego los números aumentarán 10 veces.

Tabla: normas de reticulocitos por edad

Sin embargo, la edad “hasta un año” incluye diferentes períodos muy responsables para el cuerpo del niño. Además, sería útil tener en cuenta las opiniones de varios autores considerando otras opciones, donde las normas para los niños están pintadas literalmente por días y meses y, por lo tanto, son algo diferentes a los valores anteriores. Hay una diferencia notable en las normas de los adultos.

Queda a criterio del paciente elegir en qué tabla creer, aunque se pueden encontrar varias más en distintas fuentes, pero en casos dudosos no estaría de más preguntar al laboratorio qué método se utilizó para calcular (microscopía o analizador automático) y qué referencia valores utilizados por este laboratorio.

¿Por qué hay tan pocos y cuál es su función?

El antepasado de los glóbulos rojos de la serie eritroide es una célula que no contiene hemoglobina, pero aún tiene un núcleo, como debería ser para una célula real, una célula: un eritroblasto, que en condiciones normales se transforma en un eritroblasto basófilo ( pronormoblasto, donde ya se perfilan los primeros signos de hemoglobinización (etapa policromatófila).

Si todo está en orden con la hematopoyesis y las condiciones corresponden a las fisiológicas, entonces el futuro eritrocito pasa por las etapas de pronormoblasto y normoblasto (representa la etapa final del desarrollo del eritrocito, cuando el núcleo todavía está presente en él). Con una mayor maduración de la célula, el núcleo involuciona y el siguiente precursor, el normocito policromatofílico, sin embargo lo pierde, convirtiéndose en un normocito joven llamado reticulocito. Los reticulocitos ya no tienen núcleo, pero contienen hemoglobina y tienen la capacidad de transportar oxígeno y dióxido de carbono.

Los reticulocitos se encuentran entre los indicadores de un análisis de sangre general, pero se buscan solo en los casos en que es necesario estudiar intensidad de la eritropoyesis. El cálculo de la cantidad de eritrocitos se realiza en 1000 eritrocitos y tiene como objetivo determinar la tasa de producción de glóbulos rojos por parte de la médula ósea: con la producción acelerada, la cantidad de reticulocitos aumenta, con la opresión, disminuye. Una eritropoyesis fuertemente acelerada puede conducir al hecho de que no solo los reticulocitos, sino también sus precursores, los normoblastos, saldrán de la médula ósea en cantidades mayores de las necesarias. Sin embargo, ¿por qué no se pueden contar como otras células durante un análisis de sangre clínico?

Requieren coloración separada.

Después de la pérdida del núcleo, los eritrocitos perciben solo colorantes ácidos y la microscopía óptica no revela estructuras intracelulares en ellos, lo que permite atribuir los elementos formes a especies jóvenes o maduras. Sin embargo, los reticulocitos se pueden encontrar aplicando métodos de tinción especiales. La tinción supravital con azul de cresilo brillante o naranja de acridina, que revela una sustancia basófila, formaciones granulares o filamentosas, ayuda a aislar formas jóvenes, reticulocitos, de la masa total (1000 células) de glóbulos rojos en un frotis.

Por su parte, al tener en el citoplasma una sustancia reticulocitaria específica de reticulocitos que determina el nombre de las células (sustancia reticulofilamentosa), no todas son “iguales de la cara”, por lo que se dividen en 5 grupos, cada uno de los cuales tiene su Características propias de la localización de la sustancia basófila (BS):

1. Reticulocitos nucleares, que obtuvieron su nombre de la disposición de BV en forma de corola o núcleo.
2. Células en forma de bola - BV se asemeja a bultos o una bola.
3. Reticulocitos de malla completa: la sustancia basófila está representada por una malla densa;
4. Formas de malla incompletas: BV permaneció como hilos separados.
5. Reticulocitos de polvo: pequeños granos en las células y hay una sustancia basófila.

"Juventud" a corto plazo

En la sangre periférica de adultos sanos no circula más del 1% de los eritrocitos jóvenes, que pertenecen mayoritariamente a los grupos 4 y 5 (83%). Los reticulocitos de los grupos 3 y 4 son mucho más pequeños, juntos constituyen alrededor del 18%, y el grupo 1 (células nucleares) generalmente aparece solo en caso de regeneración mejorada.

Los eritrocitos permanecen en una "edad joven" y se llaman reticulocitos por un corto tiempo: 30-40 horas del tiempo asignado, no abandonan el estroma de la médula ósea, formando allí una cierta reserva de sangre roja, y después de la salida, que está regulada principalmente por la hormona glicoproteica humoral eritropoyetina, 35-45 horas viajan libremente a través de los vasos sanguíneos. En la sangre periférica, los reticulocitos finalmente se despiden de la "juventud": pierden su retículo y pasan a realizar las funciones principales de una célula adulta, que, como se mencionó anteriormente, es difícil llamar célula: no tiene núcleo ( "derivados de células").

¡Necesita un conteo de reticulocitos!

En determinadas circunstancias, aumenta la producción de eritrocitos en la médula ósea, por lo tanto, aumenta la liberación de formas jóvenes al torrente sanguíneo o, por el contrario, la inhibición de la hematopoyesis inhibirá la liberación de reticulocitos y luego se reducirá su número en la sangre. Un intento de evaluar la eficacia de la eritropoyesis, por regla general, comienza con el recuento de glóbulos rojos recién extraídos de la médula ósea.

El uso de la designación RET en el análisis clínico también se debe a sospechas de una mayor destrucción de eritrocitos en la sangre (hemólisis). Sin embargo, al descubrir la causa de la destrucción celular, surge la pregunta: ¿cómo reacciona la médula ósea ante tales eventos, trata de compensar las pérdidas con formas jóvenes o permanece indiferente? Además, el aumento (o disminución) de eritrocitos jóvenes puede informar sobre el comportamiento de la médula ósea en otras circunstancias:

• El uso de medicamentos que afectan el trabajo del principal órgano hematopoyético (preparaciones de hierro, terapia con vitamina B 12 y ácido fólico);
• tratamiento con eritropoyetina, que se sabe que controla la liberación de reticulocitos de la médula ósea);
• El estado de la médula ósea después del trasplante de un órgano de donante.

Los reticulocitos están elevados, ¿qué significa esto?

Los valores elevados del contenido de formas jóvenes en la población de células de eritrocitos pueden indicar la presencia de diversos procesos patológicos y la reacción de la médula ósea a su presencia:

1. Es poco probable que la pérdida de sangre, especialmente masiva, no obligue a un cerebro sano a trabajar intensamente; después de todo, las pérdidas deben reponerse lo antes posible, por lo que la cantidad de reticulocitos puede aumentar al 10 - 12% (‰ o 100 - 120 reticulocitos por 1000 eritrocitos - 1/10 parte).
2. La destrucción de glóbulos rojos debido a la entrada de venenos hemolíticos o debido a otras circunstancias tampoco dejará a la médula ósea "indiferente": el aumento de la descomposición de los eritrocitos maduros ciertamente aumentará la proporción de formas jóvenes (a veces esta proporción puede llegar a 50 %).
3. Una enfermedad tan grave como la anemia hemolítica no pasa desapercibida, provocando un aumento del RET hasta en un 300%, es decir, ya no es necesario buscar reticulocitos en los eritrocitos, sino al revés, ya que todas las formas serán jóvenes , y los adultos tendrán tiempo de colapsar.
4. Acompañado de reticulocitosis y otra patología hematológica (policitemia, talasemia), así como metástasis en la médula ósea de neoplasia de diversa localización.
5. Los valores de los reticulocitos aumentarán en caso de hipoxia aguda (falta de oxígeno) debido a diversas circunstancias que pueden perseguir a una persona desde el nacimiento hasta la vejez.
6. Las infecciones como la malaria pueden causar un mayor número de células jóvenes.
7. Se observa reticulocitosis con un tratamiento eficaz con preparaciones de hierro para IDA (después de 1-2 semanas), es posible un salto al 200% (crisis de reticulocitos) después de aproximadamente una semana desde el inicio de las medidas terapéuticas en el caso de anemia por deficiencia de ácido fólico B12 .

Pequeño o no

Se observa una caída en el nivel de reticulocitos cuando se suprime el germen de hematopoyesis de eritrocitos y se reduce la producción de eritrocitos completos por varias razones, de las cuales se puede distinguir:

• Anemia aplásica, en la que sufren todas las líneas sanguíneas;
• Enfermedades renales que inhiben la síntesis de eritropoyetina, necesaria para regular la liberación de células jóvenes de la médula ósea;
• enfermedades hematológicas autoinmunes;
• Falta de vitamina B 12 y ácido fólico, que tiene un efecto muy negativo en la función de la médula ósea, ya que es necesaria para la maduración celular. En este caso, el desarrollo se detiene a nivel del eritroblasto: las células son grandes, frágiles, por lo tanto no plásticas, sin capacidad de filtrarse en los capilares estrechos (anemia megaloblástica);
• Alcoholismo (¿qué tipo de renovación de sangre hay?);
• mixedema;
• Metástasis de neoplasias en el sistema esquelético.

Finalmente

La búsqueda y conteo de reticulocitos se realiza en 1000 eritrocitos, por lo tanto se refiere al análisis de sangre general. Si todo está bien con una persona, entonces no tiene sentido producir un color separado y buscar formas jóvenes, que en tales casos no contienen ninguna información. Otra cosa es si hay sospechas de que algo anda mal con la línea de eritrocitos, entonces estas células pueden aclarar la situación hasta cierto punto.

Mientras tanto, en otros casos, al percibir este estudio como uno separado, las personas preguntan cómo prepararse para el análisis para obtener un resultado confiable. Tradicionalmente, KLA se toma con el estómago vacío, para los reticulocitos, y esto no es importante, por lo que no debe preocuparse. Además, si se extrae sangre venosa para análisis o la prueba se realiza con un analizador automático de alta calidad, no tendrá que visitar el laboratorio por segunda vez. Todo se anotará en el análisis de sangre general.

Recuento de reticulocitos

Reticulocitos: un indicador del número de células, precursores de los glóbulos rojos, formados en la médula ósea. Reticulocitos: los glóbulos rojos jóvenes reflejan la capacidad regenerativa de la médula ósea. El recuento de reticulocitos se utiliza para evaluar la intensidad de la hematopoyesis. El estudio se lleva a cabo con: una disminución en el número de glóbulos rojos, sospecha de hemólisis, evaluación de la eritropoyesis, en el tratamiento de la anemia con preparaciones de hierro y vitamina B 12, eritropoyetina.

Los reticulocitos son eritrocitos inmaduros no nucleares, cuya maduración se produce a las pocas horas de entrar en la sangre periférica desde la médula ósea. El número de reticulocitos formados refleja la actividad eritropoyética de la médula ósea. En otras palabras, el contenido de reticulocitos refleja la tasa de formación de eritrocitos y sirve como indicador de la respuesta de la médula ósea a la anemización.

Además de los parámetros generalmente aceptados de los reticulocitos: el contenido absoluto y relativo (%) de los reticulocitos, la aparición de nuevos analizadores hematológicos (tinción con tintes especiales para ácidos nucleicos) hizo posible obtener parámetros de reticulocitos adicionales:

reticulocitos con un contenido medio de ARN (MFR%, fracción de reticulocitos con una fluorescencia media);

reticulocitos de ARN alto (HFR%, fracción de reticulocitos de alta fluorescencia);

fracción de reticulocitos inmaduros (IRF%, fracción de reticulocitos inmaduros).

Recuento de reticulocitos en un frotis después de teñirlos con colorantes especiales

El recuento de reticulocitos en un frotis después de teñirlos con colorantes especiales es, en la práctica, el método más utilizado para contar el número de reticulocitos. Esto se debe al hecho de que el método es simple, bastante económico y no requiere un equipo costoso especial, por lo que puede usarse en cualquier laboratorio de diagnóstico clínico.

Principio del método

Identificación de la sustancia de malla granular de los reticulocitos con tinción supravital con colorantes alcalinos con su posterior recuento en un frotis de sangre.

reactivos

Puedes utilizar uno de los siguientes tintes:

1. Solución saturada de azul de cresilo brillante en alcohol absoluto (para preparar alcohol absoluto, es necesario soportar etanol al 96% en varios cambios de polvo de sulfato de cobre calcinado). Para 100 ml de alcohol absoluto, se toman 1,2 g de pintura.
2. Solución de Azure I: Azur I - 1 g, oxalato de amonio - 0,4 g, cloruro de sodio - 0,8 g, alcohol etílico 96% - 10 ml, agua destilada - 90 ml. La solución de pintura en una botella cerrada se coloca durante 2-3 días en un termostato a 37 ° C y se agita vigorosamente periódicamente. Luego se enfrió a temperatura ambiente y se filtró a través de papel filtro. La solución se almacena en un recipiente de vidrio oscuro. Si aparece un precipitado, la pintura debe filtrarse nuevamente.
3. Solución Azure II: Azur II - 1 g, citrato de sodio - 5 g, cloruro de sodio - 0,4 g, agua destilada - 45 ml. La solución se deja en un termostato a 37°C durante 2 días, removiendo ocasionalmente. Para acelerar la disolución, la pintura se puede calentar a fuego lento durante 15 a 20 minutos, sin que hierva. Enfriar a temperatura ambiente y filtrar. Almacenar en un recipiente de vidrio oscuro.

Equipamiento especial

Progreso de la definición

La tinción de reticulocitos se realiza en vidrio o en un tubo de ensayo.

Tinción de reticulocitos en vidrio

Cuando se tiñen reticulocitos en vidrio, se calienta sobre la llama de un mechero un portaobjetos de vidrio bien lavado y desengrasado. Se aplica una gota de uno de los colorantes enumerados anteriormente al vidrio con una varilla de vidrio y se prepara una mancha de pintura con vidrio esmerilado. Se utiliza un gráfico de vidrio para marcar el lado del vidrio sobre el que se aplica una mancha de pintura. De esta forma, el vidrio puede prepararse para uso futuro y almacenarse en un lugar seco y oscuro. Se prepara una cámara húmeda antes del análisis. Por lo general, para este propósito utilizan una placa de Petri con rollos de algodón humedecido o papel de filtro colocados a lo largo de los bordes. Se aplica una gota de sangre a una mancha de pintura, se prepara una mancha delgada y se coloca inmediatamente en una cámara húmeda durante 3-10 minutos. A continuación, los frotis se secan al aire.

Tinción de reticulocitos in vitro

La tinción de reticulocitos in vitro difiere cuando se utilizan diferentes colorantes.

Método 1: tinción de reticulocitos in vitro con azul de cresilo brillante.

Antes de usar, prepare una solución de trabajo de azul de cresilo brillante en un tubo de ensayo a base de una gota de solución de oxalato de potasio al 1% 4 gotas de solución de pintura de azul de cresilo brillante. Se añaden 0,04 ml de sangre a la pintura (dos pipetas hasta la marca de 0,02). La mezcla se mezcla completa pero suavemente y se deja durante 30 minutos. Luego mezcle nuevamente y prepare frotis finos.

Método 2: tinción de reticulocitos in vitro con azure II.

Coloque 0,05 ml de solución de colorante azul II y 0,2 ml de sangre en un tubo de ensayo. La mezcla se mezcla bien y se deja durante 20 a 30 minutos. Mezclar de nuevo y preparar frotis finos.

Método 3: tinción de reticulocitos in vitro con azul I.

Coloque 0,3 - 0,5 ml de solución de pintura azul I y 5 - 6 gotas de sangre con una pipeta del aparato Panchenkov en un tubo de ensayo. El tubo de ensayo se cierra con un tapón de goma, la mezcla se mezcla completa pero suavemente y se deja durante 1-1,5 horas (los reticulocitos se tiñen mejor con una exposición de 1,5-3 horas). Mezclar y preparar trazos finos.

Los tintes listos para usar para reticulocitos están actualmente disponibles comercialmente. La tinción de reticulocitos con su ayuda se lleva a cabo de acuerdo con las instrucciones adjuntas.

Recuento de reticulocitos.

Los frotis preparados por uno de los métodos anteriores se microscopian con una lente de inmersión. En el frotis, los reticulocitos y los eritrocitos se tiñen de color amarillo verdoso, la sustancia granular-filamentosa en los reticulocitos es azul (cuando se tiñe con azur II y azul de cresilo brillante) o azul violeta (cuando se tiñe con azur I).

Fotos de reticulocitos:

Encuentre campos de visión donde los eritrocitos se ubican por separado. En estos campos de visión, es necesario contar al menos 1000 eritrocitos y anotar entre ellos el número de eritrocitos que contienen una sustancia granular-filamentosa. Se obtiene mayor precisión al contar 2000 - 3000 eritrocitos.

Debido al hecho de que una gran cantidad de eritrocitos se encuentra en el campo de visión, lo que dificulta el recuento, es necesario limitar (reducir) el campo de visión. Para hacer esto, puede usar un ocular especial, en el que puede reducir el campo de visión al tamaño requerido, o usar una "ventana" especial (un círculo con un diámetro ligeramente más pequeño que el ocular se corta en papel, se corta un pequeño rombo en el centro del círculo y la ventana resultante se inserta en el ocular).

El número de reticulocitos contados se expresa por 100 (en porcentaje) o por 1000 (en ppm) de eritrocitos.

Ejemplo: Al contar 1000 eritrocitos en un frotis, se reveló que 15 de cada 1000 eritrocitos tienen una sustancia de malla granular de un grado u otro, es decir, son reticulocitos. Por tanto, el número de reticulocitos en este caso es del 1,5% o 15‰.

Literatura:

• Manual "Métodos de investigación de laboratorio en la clínica" editado por Menshikov V.V. - Moscú, "Medicina", 1987
• Lyubina A. Ya., Ilyicheva L. P. y coautores - "Estudios de laboratorio clínico" - Moscú, "Medicina", 1984

Contar el número de reticulocitos usando microscopía fluorescente

El método de recuento del número de reticulocitos mediante microscopía de fluorescencia es sencillo y requiere poco tiempo, más preciso que el método convencional, ya que la microscopía de fluorescencia revela los granos más pequeños de la sustancia reticular-filamentosa.

reticulocitos

Los reticulocitos son glóbulos rojos jóvenes formados después de la pérdida de núcleos por los normoblastos. Un rasgo característico de los reticulocitos es la presencia en su citoplasma de una sustancia granular-filamentosa (retículo), que representa agregados de ribosomas y mitocondrias.

Inclusiones patológicas en eritrocitos

Los cuerpos de Jolly (cuerpos de Howell-Jolly) son pequeñas inclusiones redondas de color rojo violeta con un tamaño de µm, que se encuentran 1 (raramente 2-3) en un eritrocito. Son los restos del núcleo tras la extracción de sus RES. Se detectan con hemólisis intensa y "sobrecarga" de RES, después de esplenectomía, con anemia megaloblástica.

Estudio citoquímico de lípidos

El estudio citoquímico de los lípidos se basa en el uso de colorantes que se disuelven en las grasas (Sudán III, Sudán IV, Sudán negro, etc.). Para identificar la grasa neutra se utiliza Sudán III, que tiñe la grasa de naranja. Los lipoides se detectan mejor con negro de Sudán (tinción negra).

Análisis de orina según Nechiporenko

El método Nechiporenko en el diagnóstico de laboratorio doméstico es el método más común para la determinación cuantitativa de elementos formes en la orina. Este método es el más simple, accesible para cualquier laboratorio y conveniente en la práctica ambulatoria, y también tiene una serie de ventajas sobre otros métodos cuantitativos conocidos para estudiar el sedimento de orina. Según el método de Nechiporenko, la cantidad de elementos formados (eritrocitos, leucocitos y cilindros) se determina en 1 ml de orina.

©18 Diagnóstico de laboratorio

Recuento de reticulocitos en frotis de sangre (cantidades)

¿Qué son los reticulocitos?

Los reticulocitos son formas jóvenes de eritrocitos (predecesores de los eritrocitos maduros) que contienen una sustancia granular-filamentosa, que se detecta con una tinción especial (supravital). Los reticulocitos se encuentran tanto en la médula ósea como en la sangre periférica. El tiempo de maduración de los reticulocitos es de 4-5 días, de los cuales en 3 días maduran en la sangre periférica, después de lo cual se convierten en eritrocitos maduros. En los recién nacidos, los reticulocitos se encuentran en mayor número que en los adultos.

El número de reticulocitos en la sangre refleja las propiedades regenerativas de la médula ósea. Su recuento es importante para evaluar el grado de actividad de la eritropoyesis (producción de eritrocitos): cuando la eritropoyesis se acelera, la proporción de reticulocitos aumenta, y cuando se ralentiza, disminuye. En el caso de una mayor destrucción de eritrocitos, la proporción de reticulocitos puede superar el 50%. Una fuerte disminución en el número de eritrocitos en la sangre periférica puede conducir a un aumento artificial en el número de reticulocitos, ya que este último se calcula como un porcentaje de todos los eritrocitos. Por lo tanto, para evaluar la gravedad de la anemia, se utiliza el "índice reticular": % reticulocitos x hematocrito / 45 x 1,85, donde 45 es hematocrito normal, 1,85 es el número de días necesarios para que ingresen nuevos reticulocitos a la sangre. Si índice< 2 – говорит о гипопролиферативном компоненте анемии, если >2-3, entonces hay un aumento en la formación de glóbulos rojos.

Indicaciones a efectos del análisis:

• diagnóstico de hematopoyesis ineficaz o producción reducida de glóbulos rojos;
• diagnóstico diferencial de anemia;
• evaluación de la respuesta a la terapia con hierro, ácido fólico, vitamina B12, eritropoyetina;
• monitorear el efecto del trasplante de médula ósea;
• seguimiento de la terapia con eritrosupresores.
• Preparación para el estudio: el estudio se realiza con el estómago vacío o al menos 2 horas después
• la última comida, al tomar sangre, es necesario evitar la compresión prolongada de la vena con un torniquete.

¿Cuándo aumenta el número de reticulocitos (reticulocitosis)?

• Anemia posthemorrágica (crisis reticulocítica, aumento de 3 a 6 veces).
• Anemia hemolítica (hasta el 300%).
• Falta aguda de oxígeno.
• Tratamiento de la anemia por deficiencia de vitamina B12 (crisis de reticulocitos durante la terapia con vitamina B12).
• Terapia de la anemia ferropénica con preparados de hierro (día de tratamiento).
• Talasemia.
• Malaria.
• Policitemia.
• Metástasis de tumores en la médula ósea.

¿Cuándo disminuye el número de reticulocitos?

• Anemia aplásica.
• anemia hipoplásica.
• Anemia por deficiencia de vitamina B12 no tratada.
• Metástasis de neoplasias en el hueso.
• Enfermedades autoinmunes del sistema hematopoyético.
• Mixedema.
• Enfermedades renales.
• Alcoholismo.

reticulocitos

Los reticulocitos son glóbulos rojos jóvenes formados después de la pérdida de núcleos por los normoblastos. Un rasgo característico de los reticulocitos es la presencia en el citoplasma de una sustancia granular-filamentosa que representa agregados de ribosomas y mitocondrias. Esta sustancia se detecta con un método de tinción especial: supravital (intravital), es decir, sin fijación previa de las células. La sustancia granular-filamentosa en varios reticulocitos difiere en polimorfismo; cuanto más joven es la célula, más abundante es la sustancia. En los reticulocitos más jóvenes, tiene la forma de una maraña espesa; en las células más maduras, aparece en forma de malla, filamentos individuales y luego granos individuales. En frotis teñidos por métodos hematológicos convencionales, los reticulocitos de color rosa grisáceo son policromatofílicos, es decir, se tiñen con diferentes colorantes.

La determinación del número de reticulocitos se realiza mediante microscopía de frotis especialmente teñidos.

3.2.1 Método para teñir frotis de sangre para reticulocitos según Alekseev (recuento según Fonio)

Principio: El método se basa en contar el número de reticulocitos en frotis de sangre teñidos por cada 1000 eritrocitos. Se preparan 2 frotis simultáneamente (para plaquetas y reticulocitos).

Reactivo: solución de pintura de trabajo según Alekseev

El curso de la determinación: en el capilar para determinar la ESR, se extrae una solución de trabajo hasta la marca de 0,75 μl y un capilar lleno de sangre de una punción en el dedo del paciente. La proporción de tinte a sangre es de 1:4. La mezcla se deja durante 2 horas, luego se hace una mancha fina en un portaobjetos de vidrio. El frotis se seca al aire y se microscopia por inmersión.

El recuento se realiza de la siguiente manera: las rejillas de reticulocitos se tiñen de azul. Durante el recuento de eritrocitos en el campo de visión, se cuenta el número de reticulocitos. Se cuentan 1000 eritrocitos. El resultado se expresa en porcentaje.

Valor estándar: La sangre de una persona sana contiene 0.2-1.0%

(o 2-10 incluso permitido hasta 12 ppm) reticulocitos

Importancia clínica y diagnóstica: La aparición de reticulocitos en la sangre periférica indica un aumento del trabajo de la médula ósea y se utiliza en la evaluación de varios tipos de anemia.

Se observa un aumento en el número de reticulocitos después de la pérdida de sangre, con anemia hemolítica.

Reticulocitosis aguda - observada con ictericia hemolítica

Una disminución en el número de reticulocitos en presencia de anemia indica un tipo de hematopoyesis aplásica.

Según el nivel de reticulocitos en la sangre, la anemia se divide en:

Regenerativo (el número de reticulocitos es del 0,5 al 5%; estas son anemias poshemorrágicas);

Hiperregenerativo (el número de reticulocitos es más del 5%; estas son anemias hemolíticas);

Hipo - y regenerante (el número de reticulocitos se reduce o están ausentes, a pesar del curso severo de la anemia - hipo - y aplásico, hierro y. En 12 - anemia por deficiencia).

Tinción de reticulocitos supravitales.

Detección de la sustancia de malla granular de los reticulocitos cuando se tiñen con azul de cresilo brillante sin fijación previa.

Solución de azul de cresilo brillante al 1%: se disuelven 50 mg de colorante en 5 ml de solución salina y se agregan 20 mg de citrato de sodio (la solución se almacena en un recipiente de vidrio oscuro, es buena por varios días).

Coloque 2 gotas de una solución de colorante azul de cresilo brillante al 1% y 1 gota de sangre en un portaobjetos de vidrio con un pocillo. Se agita suavemente con una varilla de vidrio y se coloca la mezcla en una cámara húmeda (placa de Petri, en la que se colocan alrededor de los bordes una gasa o rollos de algodón ligeramente humedecidos) durante 30 minutos a temperatura ambiente. Luego se hacen frotis y se secan.

En los frotis, los eritrocitos se tiñen de color verde amarillento y la sustancia de malla granular en los reticulocitos es azul y púrpura.

Los frotis se microscopian con una lente de inmersión. Los reticulocitos se cuentan por 1000 eritrocitos (se obtiene mayor precisión al contar los eritrocitos).

Aumento del número de reticulocitos visto con:

estimulación de la eritropoyesis (pérdida de sangre, hemólisis, crisis de reticulocitos con tratamiento exitoso de la anemia por deficiencia de B 12, falta aguda de oxígeno).

Disminución del número de reticulocitos visto con:

inhibición de la eritropoyesis (anemias aplásicas e hipoplásicas, anemias por deficiencia de B 12 no tratadas, metástasis de cáncer en los huesos),

enfermedades renales, enfermedades endocrinas.

MÉTODOS PARA CONTAR EL NÚMERO DE RETICULOCITOS

(1) Contar el número de reticulocitos en un frotis después de teñirlos con colorantes especiales. Este método es el método más utilizado en la práctica debido a que es simple, bastante económico y no requiere equipo especial costoso, por lo que puede usarse en cualquier laboratorio de diagnóstico clínico. El principio del método se basa en la detección de una sustancia de malla granular de reticulocitos durante la tinción supravital con colorantes alcalinos (solución saturada de azul de cresilo brillante en alcohol absoluto/solución azul I/solución azul II) con su posterior recuento en sangre. frotis. La tinción de reticulocitos se realiza en vidrio o en un tubo de ensayo. El recuento se lleva a cabo usando un microscopio: los frotis preparados por uno de los métodos anteriores se microscopian con una lente de inmersión; en un frotis, los reticulocitos y los eritrocitos se tiñen de color verdoso amarillento, la sustancia granular-filamentosa en los reticulocitos es azul (cuando se tiñe con azul II y azul de cresilo brillante) o violeta azulado (cuando se tiñe con azul I). (2) Contar el número de reticulocitos usando microscopía fluorescente. Este método es simple y toma un poco de tiempo, más preciso que el método convencional, ya que la microscopía fluorescente revela los granos más pequeños de la sustancia reticular-filamentosa, pero solo es posible con un microscopio luminiscente y tintes especiales, y por lo tanto está disponible solo para algunos laboratorios. El principio de contar el número de reticulocitos usando microscopía fluorescente se basa en el uso de la capacidad de la sustancia de los reticulocitos para emitir fluorescencia después del tratamiento de la sangre con naranja de acridina. La sangre se mezcla con naranja de acridina en un tubo de ensayo o mezclador en una proporción de 1 parte de sangre y 10 partes de colorante (la mezcla se puede almacenar por no más de 5 horas). La mezcla se agita durante 2 minutos, se aplica una gota de la mezcla a un portaobjetos de vidrio y se cubre con un cubreobjetos. En este caso, el líquido no debe pasar más allá del cubreobjetos. Microscópicamente utilizando un filtro de luz ZhS-17. En la preparación, los eritrocitos tienen un contorno verde oscuro y no emiten fluorescencia, mientras que en los reticulocitos, la sustancia reticulada granular brilla de color rojo brillante, lo que facilita el recuento de reticulocitos. En sangre estabilizada con heparina o citrato de sodio no se observa fluorescencia de reticulocitos. (3) Recuento automático de reticulocitos con analizador de hematología. En los analizadores hematológicos modernos, la tecnología para el recuento de células sanguíneas se basa en el método conductimétrico propuesto por H. Wallace y Joseph R. Culter en 1947. El principio del método es contar el número y determinar la naturaleza de los impulsos que ocurren cuando una célula pasa a través de un orificio de pequeño diámetro (apertura), en ambos lados de los cuales hay dos electrodos aislados unos de otros. Cada paso de una celda a través de la abertura va acompañado de la aparición de un impulso eléctrico, que es registrado por un sensor electrónico. El dispositivo realiza la división de las células en categorías (eritrocitos, leucocitos, plaquetas, sedimentos) en función del análisis de la amplitud de los pulsos recibidos.. Para determinar la concentración de células, es suficiente pasar un cierto volumen de la muestree a través del canal y cuente el número de pulsos que se generan. Cabe señalar que, además del parámetro clásico de reticulocitos, el contenido relativo (%) de reticulocitos (% RET, porcentaje de reticulocitos), determinado mediante los métodos 1 y 2 de diagnóstico de laboratorio, debido al advenimiento de hematológicos de alta tecnología analizadores (método 3), se hizo posible obtener (por ejemplo, utilizando un colorante fluorescente patentado para el analizador Sysmex-XT-2000i) parámetros de reticulocitos informativos adicionales: reticulocitos con bajo contenido de ARN, los más maduros (% LFR, fracciones de reticulocitos de baja fluorescencia , fracción de reticulocitos de baja fluorescencia); reticulocitos con un contenido promedio de ARN (% MFR, fracciones de reticulocitos de fluorescencia media) - una fracción de reticulocitos con fluorescencia media); reticulocitos con un alto contenido de ARN (HFR%, fracciones de reticulocitos de alta fluorescencia) - una fracción de reticulocitos con alta fluorescencia); fracción de reticulocitos inmaduros (IRF%, fracción de reticulocitos inmaduros). La diferenciación de los reticulocitos, en función del grado de madurez y, en consecuencia, del contenido de ácidos nucleicos, es un reflejo de la actividad hematopoyética de la médula ósea. Método (analizador Sysmex-XT-2000i). En la celda de flujo, las celdas cruzan el haz de un láser semiconductor, mientras que el haz se dispersa en ángulos grandes y pequeños y se excita el colorante fluorescente. Esto permite determinar las diversas etapas de madurez de los reticulocitos por el contenido de ARN en las células y la intensidad de su luminiscencia. El recuento automatizado de reticulocitos es muy preciso (se cuentan más de los eritrocitos) y reproducible (el coeficiente de variación es de alrededor del 6 %). Esta tecnología proporciona un recuento preciso de reticulocitos incluso en concentraciones extremadamente bajas.

Reticulocitopenia y reticulocitosis, causas de desarrollo, valor diagnóstico de su detección.

reticulocitos

Los reticuloints son glóbulos rojos jóvenes que se forman después de la pérdida de núcleos por los normoblastos. Un rasgo característico de los reticulocitos es la presencia en el citoplasma de una sustancia granular-filamentosa que representa agregados de ribosomas y mitocondrias. Esta sustancia se detecta mediante un método de tinción especial: supravital, es decir, sin fijación previa de las células. La sustancia granular-filamentosa en varios reticulocitos se distingue por polimorfismo: cuanto más joven es la célula, más abundante es la sustancia. En los reticulocitos más jóvenes, tiene la forma de una maraña espesa; en las células más maduras, aparece en forma de malla, filamentos individuales y luego granos individuales. En frotis teñidos por métodos hematológicos convencionales, los reticulocitos de color rosa grisáceo son policromatofílicos, es decir, se tiñen con diferentes colorantes.

La determinación del número de reticulocitos se realiza mediante microscopía de frotis teñidos especialmente.

Un método unificado para contar el número de reticulocitos después de teñirlos con azul de cresilo brillante, azul I o azul II directamente sobre vidrio o en un tubo de ensayo (1972).

Tinción supravital con colorantes que revelan la sustancia granular-filamentosa de los reticulocitos.

reactivos Puedes usar uno de los siguientes tintes.

1. Solución saturada de azul de cresilo brillante en alcohol absoluto (para preparar alcohol absoluto se debe mantener etanol 96% en varios cambios de polvo de sulfato de cobre calcinado). Para 100 ml de alcohol absoluto, se toman 1,2 g de pintura.

2. Solución de azul I, propuesta por P. N. Korikov: azul 1 - 1 g, oxalato de amonio - 0,4 g, cloruro de sodio - 0,8 g, alcohol etílico 96% 10 ml, agua destilada - 90 ml. La solución de pintura en una botella cerrada se coloca durante 2-3 días en un termostato a 37 ° C y se agita vigorosamente periódicamente. Luego se enfrió a temperatura ambiente y se filtró a través de papel filtro. La solución se almacena en un recipiente de vidrio oscuro. Si aparece un precipitado, la pintura debe filtrarse nuevamente.

3. Una solución de azur II de la siguiente composición: azur II 1 g, citrato de sodio 5 g, cloruro de sodio 0,4 g, agua destilada 45 ml. La solución se deja en un termostato a 37 °C durante 2 días, removiendo ocasionalmente. Para acelerar la disolución de la pintura, puedes calentarla a fuego lento durante un minuto, sin que llegue a hervir. Enfriar a temperatura ambiente y filtrar). Almacenar en un recipiente de vidrio oscuro.

Equipamiento especial. Microscopio.

Un portaobjetos de vidrio bien lavado y desengrasado se calienta sobre la llama de un mechero. Con una varilla de vidrio se aplica sobre el vidrio una gota de uno de los colorantes y se prepara una mancha de pintura con vidrio pulido. Marque el lado del vidrio en el que se aplica la mancha de pintura con un lápiz de vidrio. De esta forma, el vidrio puede prepararse para uso futuro y almacenarse en un lugar seco y oscuro. Se aplica una gota de sangre a una mancha de pintura, se prepara una capa delgada y se coloca inmediatamente en una cámara húmeda durante 3-4 minutos (puede usar una placa de Petri con rollos de algodón humedecido o papel de filtro colocado a lo largo de la bordes). A continuación, los frotis se secan al aire.

En frotis preparados de esta manera, los eritrocitos se tiñen de color amarillento-verdoso, la sustancia granular-filamentosa es azul.

Método 1: antes de usar, prepare una solución de trabajo de azul de cresilo brillante en un tubo de ensayo por gota de solución de oxalato de potasio al 1% 4 gotas de solución de colorante 1. Agregue 0,04 ml de sangre al colorante (dos pipetas hasta la marca de 0,02). Mezclar a fondo pero suavemente y dejar actuar durante 30 minutos. Mezclar y preparar trazos finos.

Método 2: se colocan 0,05 ml de la solución de colorante 3 y 0,2 ml de sangre en un tubo de ensayo. La mezcla se mezcla bien y se deja namin. Mezclar y preparar trazos finos.

Método 3: se colocan 0,3-0,5 ml de solución de colorante 2 y 5-6 gotas de sangre en un tubo de ensayo con una pipeta del aparato de Panchenkov. El tubo se cubre con un tapón de goma, la mezcla se mezcla completa pero suavemente y se deja durante 1-2 horas (los reticulocitos se tiñen mejor cuando se exponen durante 2-3 horas). Mezclar y preparar trazos finos.

En los frotis, los eritrocitos se tiñen de color amarillento-verdoso, la sustancia granular-filamentosa azul o azul-violeta.

Los frotis preparados por uno de los métodos anteriores se microscopian con una lente de inmersión. Es necesario contar al menos 1000 eritrocitos y anotar entre ellos el número de eritrocitos que contienen una sustancia granular-filamentosa. En la práctica, para una mayor precisión, se usa un ocular especial, en el que el campo de visión se puede reducir al tamaño requerido. Con frotis finos uniformes, en los que los eritrocitos están dispuestos en una fila, se selecciona un campo de visión de este tipo, en el que hay, por ejemplo, 50 eritrocitos, y luego se calculan 20 campos de visión de este tipo.

En ausencia de un ocular prefabricado, se puede preparar fácilmente, para lo cual se desenrosca el ocular 10X, se coloca un trozo de papel con un pequeño cuadrado recortado y se atornilla.

El número de reticulocitos contados se expresa por 1000 o por 100 eritrocitos.

Contar el número de reticulocitos mediante microscopía de fluorescencia.

Uso de la capacidad de la sustancia de los reticulocitos para emitir fluorescencia después del tratamiento de la sangre con naranja de acridina.

1. Una solución de naranja de acridina en solución isotónica de cloruro de sodio y una concentración de 1:5000. Para preparar una solución isotónica, se recomienda utilizar agua destilada pH 5,8-6,8 La solución de naranja de acridina debe ser fresca; guárdelo por no más de 3-5 días en una botella oscura con un tapón molido.

2. Aceite de inmersión no fluorescente.

Se puede utilizar afluol o aceite de inmersión normal con fluorescencia apagada con nitrobenceno (0,3 ml de nitrobenceno por 1 ml de aceite). Yu. N. Zubzhitsky propone utilizar anisol destilado como aceite no fluorescente.

Equipamiento especial. Microscopio ultravioleta MUF-ZM o luminiscente.

La sangre se mezcla con naranja de acridina en un tubo de ensayo o mezclador en una proporción de 1 parte de sangre y 10 partes de colorante (la mezcla se puede almacenar por no más de 5 horas). La mezcla se agita durante 2 min, se aplica una gota de la mezcla a un portaobjetos de vidrio y se cubre con un cubreobjetos.

Microscópicamente utilizando un filtro de luz ZhS-17.

En la preparación, los eritrocitos no emiten fluorescencia, y en los reticulocitos, la sustancia granular-filamentosa brilla de color rojo brillante.

Se observa que en sangre estabilizada con heparina o citrato de sodio no se observa fluorescencia de reticulocitos.

El método es sencillo y lleva poco tiempo; gracias al brillo brillante, los reticulocitos son fáciles de contar.

Valores normales. En personas sanas, la cantidad de reticulocitos es ppm, o 0.2-1.2%.

El número de reticulocitos en la sangre refleja las propiedades regenerativas de la médula ósea, y su evaluación se usa ampliamente en diversas anemias (ver Tabla 24). Se observa un aumento en el número de repculocitos después de la pérdida de sangre, con anemia hemolítica, especialmente durante una crisis (el número de reticulocitos puede ser %), así como durante el tratamiento de la anemia de Addison Birmer con vitamina B12 (crisis de reticulocitos - un aumento en el número de reticulocitos en el día 4-8 de tratamiento). Una disminución en el número de reticulocitos es característica de la anemia hipoplásica, recurrencia de la anemia de Addison-Birmer

La determinación del número de reticulocitos se puede utilizar para determinar la producción de eritropoyesis y calcular la vida útil de los glóbulos rojos.

Literatura. Gomzyakova N.V. Lab, caso, 1960, No. 5, p. 38-39;

Zubzhitsky Yu.N.Laboratorio. caso; 1967, nº 2, pág. 35;

Recuento de reticulocitos

Principio. Tinción supravital con colorantes que revelan la sustancia de malla granular de los reticulocitos.

reactivos Se puede utilizar uno de los siguientes colorantes: 1) solución saturada de azul de cresilo brillante en etanol absoluto. Para preparar alcohol absoluto, es necesario soportar etanol al 96% en varios cambios de polvo de sulfato de cobre calcinado. Para 100 ml de alcohol absoluto, tome 1,2 g de pintura; 2) solución de azul 1 según P. N. Korikov: azul I - 1 g; oxalato de amonio - 0,4 g; cloruro de sodio - 0,8 g; alcohol etílico al 96% - 10 ml; agua destilada - 90 ml. La solución de pintura en una botella cerrada se coloca durante 2-3 días en un termostato a 37 ° C y se agita vigorosamente periódicamente. Luego se enfrió a temperatura ambiente y se filtró a través de papel filtro. La solución se almacena en un recipiente de vidrio oscuro. Si aparece un precipitado, la pintura debe filtrarse nuevamente; 3) solución azul II: azul II - 1 g; citrato de sodio - 5 g; cloruro de sodio - 0,4 g; agua destilada - 45 ml. La solución se deja en un termostato a 37°C durante 2 días, removiendo ocasionalmente. Para acelerar la disolución, la pintura se puede calentar a fuego lento durante 15 a 20 minutos sin que hierva. Enfriar a temperatura ambiente y filtrar. Almacenar en un recipiente de vidrio oscuro.

Progreso de la definición. Coloración sobre vidrio. Un portaobjetos de vidrio bien lavado y desengrasado se calienta sobre la llama de un mechero.

Con una varilla de vidrio se aplica sobre el vidrio una gota de uno de los colorantes y se prepara una mancha de pintura con vidrio pulido. Marque el lado del vidrio en el que se aplica la mancha de pintura con un lápiz de vidrio. De esta forma, el vidrio puede prepararse para uso futuro y almacenarse en un lugar seco y oscuro. Se aplica una gota de sangre a una mancha de pintura, se prepara una mancha a partir de ella y se coloca inmediatamente en una cámara húmeda durante 3-4 minutos (puede usar una placa de Petri con rollos de algodón humedecido, gasa o papel de filtro colocados a lo largo Los bordes). A continuación, los frotis se secan al aire.

En los frotis preparados de esta manera, los eritrocitos se tiñen de un color amarillento verdoso y la sustancia de malla granular es azul.

Colorear en un tubo de ensayo. Método 1: antes de usar, prepare una solución de trabajo de azul de cresilo brillante en un tubo de ensayo a razón de 1 gota de solución de oxalato de potasio al 1% 4 gotas de solución de pintura (reactivo 1). Se añaden 0,04 ml de sangre a la pintura (dos pipetas hasta la marca de 0,02). Mezclar a fondo pero suavemente y dejar actuar durante 30 minutos. Mezclar y preparar trazos finos.

Método 2: se colocan 0,05 ml de la solución de colorante 3 y 0,2 ml de sangre en un tubo de ensayo. La mezcla se mezcla bien y se deja durante 20-30 minutos. Mezclar y preparar trazos finos.

Método 3: agregue 0.3-0.5 ml de solución de colorante 2 y 5-6 gotas de sangre con una pipeta del aparato Panchenkov en un tubo de ensayo. El tubo se cierra con un tapón de goma, la mezcla se mezcla completa pero suavemente y se deja durante 1 a 1,5 horas (los reticulocitos se tiñen mejor cuando se exponen durante 1,5 a 3 horas). Mezclar y preparar trazos finos.

Recuento de reticulocitos. En los frotis, los eritrocitos se tiñen de color amarillo verdoso, la sustancia reticulada granular es azul o violeta azulada.

Los frotis preparados por uno de los métodos anteriores se microscopian con una lente de inmersión. Es necesario contar al menos 1000 eritrocitos (se obtiene una mayor precisión al contar 2000-3000 eritrocitos) y anotar el número de células que contienen una sustancia granular reticular entre ellas. En la práctica, para una mayor precisión, se usa un ocular especial, en el que el campo de visión se puede reducir al tamaño requerido. Con frotis finos uniformes, en los que los eritrocitos están dispuestos en una fila, se selecciona un campo de visión de este tipo, en el que hay, por ejemplo, 50 eritrocitos, y luego se calculan 20 campos de visión de este tipo.

En ausencia de un ocular prefabricado, se puede preparar fácilmente, para lo cual se desenrosca el ocular 7 ×, se coloca un trozo de papel con un pequeño cuadrado recortado y se atornilla. El número de reticulocitos contados se expresa por 1000 o por 100 eritrocitos.

reticulocitos- eritrocitos jóvenes formados después de la pérdida de núcleos por normoblastos. Un rasgo característico de los reticulocitos es la presencia en el citoplasma de una sustancia granular-filamentosa que representa agregados de ribosomas y mitocondrias. Esta sustancia se detecta con un método de tinción especial: supravital (intravital), es decir, sin fijación previa de las células. La sustancia granular-filamentosa en varios reticulocitos difiere en polimorfismo; cuanto más joven es la célula, más abundante es la sustancia. En los reticulocitos más jóvenes, tiene la forma de una maraña espesa; en las células más maduras, aparece en forma de malla, filamentos individuales y luego granos individuales. En frotis teñidos por métodos hematológicos convencionales, los reticulocitos de color rosa grisáceo son policromatofílicos, es decir, se tiñen con diferentes colorantes.

La determinación del número de reticulocitos se realiza mediante microscopía de frotis especialmente teñidos.

3.2.1 Método para teñir frotis de sangre para reticulocitos según Alekseev (recuento según Fonio)

Principio: El método se basa en contar el número de reticulocitos en frotis de sangre teñidos por cada 1000 eritrocitos. Se preparan 2 frotis simultáneamente (para plaquetas y reticulocitos).

Reactivo: solución de pintura de trabajo según Alekseev

Equipo: microscopio

El curso de la determinación: en el capilar para determinar la ESR, se extrae una solución de trabajo hasta la marca de 0,75 μl y un capilar lleno de sangre de una punción en el dedo del paciente. La proporción de tinte a sangre es de 1:4. La mezcla se deja durante 2 horas, luego se hace una mancha fina en un portaobjetos de vidrio. El frotis se seca al aire y se microscopia por inmersión.

Contar producido de la siguiente manera: las rejillas de reticulocitos se tiñen de azul. Durante el recuento de eritrocitos en el campo de visión, se cuenta el número de reticulocitos. Se cuentan 1000 eritrocitos. El resultado se expresa en porcentaje.

Valor estandar: La sangre de una persona sana contiene 0.2-1.0%

(o 2-10 incluso permitido hasta 12 ppm) reticulocitos

Valor clínico y diagnóstico: La aparición de reticulocitos en la sangre periférica indica un aumento del trabajo de la médula ósea y se utiliza en la evaluación de varios tipos de anemia.

Aumento del número de reticulocitos observado después de la pérdida de sangre, con anemia hemolítica

reticulocitosis aguda- observado en la ictericia hemolítica

Una disminución en el número de reticulocitos en presencia de anemia indica un tipo de hematopoyesis aplásica.

Según el nivel de reticulocitos en la sangre, la anemia se divide en:

- regenerativo(el número de reticulocitos 0.5-5% es anemia poshemorrágica);

- hiperregenerativo(el número de reticulocitos más del 5% es anemia hemolítica);

- hipo - y regenerante(el número de reticulocitos se reduce o están ausentes, a pesar del curso severo de la anemia: hipo y aplásica, anemia por deficiencia de hierro y vitamina B 12).