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L'ebollizione delle soluzioni enzimatiche provoca l'inattivazione della loro biochimica. Enzimologia ingegneristica

L'ebollizione delle soluzioni enzimatiche provoca l'inattivazione della loro biochimica. Enzimologia ingegneristica

La velocità di una reazione enzimatica, cioè l'attività dell'enzima, è determinata anche dalla presenza di attivatori e inibitori nel mezzo: i primi aumentano la velocità di reazione e talvolta la modificano, i secondi inibiscono la reazione. Tra i composti chimici che influenzano l'attività degli enzimi ci sono varie sostanze. Pertanto, HC1 attiva l'azione della pepsina, degli acidi biliari - lipasi pancreatica; alcuni enzimi tissutali (ossidoriduttasi, catepsine, arginasi), proteinasi vegetale, papaina, ecc. vengono attivati in modo significativo da composti contenenti gruppi SH liberi (glutatione, cisteina) e alcuni anche dalla vitamina C. Gli ioni, soprattutto, spesso fungono da attivatori, metalli bivalenti e talvolta monovalenti . Molti enzimi non sono affatto attivi in assenza di metalli. Pertanto, quando si rimuove lo zinco, l'anidrasi carbonica è praticamente priva di attività enzimatica; Inoltre, durante l'azione di questo enzima, lo zinco non può essere sostituito da nessun altro metallo. Sono noti enzimi la cui azione è attivata da alcuni metalli, in particolare l'enolasi (vedi Metabolismo dei carboidrati) è attivata da Mg 2+, Mn 2+, K +. Nella tabella 18 mostra esempi della partecipazione dei metalli all'azione di alcuni enzimi.

Tabella 18. Metalli nell'attivazione di alcuni enzimi 1 (1 Di solito è difficile tracciare il confine tra metalloenzimi (il metallo è legato in modo complesso ed è insostituibile) ed enzimi attivati dai metalli (questi ultimi accelerano solo la reazione e si dissociano facilmente).)
Enzima	Metallo	Enzima	Metallo
Citocromi	Fe	Amilasi	Circa
Catalasi	Fe	Lipasi	Circa
Perossidasi	Fe	Anidrasi carbonica	Zn
Triptofano ossidasi	Fe	Lattato deidrogenasi	Zn
Omogentisicasi	Fe	Uricaza	Zn
Ascorbato ossidasi	Sì	Carbossipeptidasi	Zn
Tirosinasi	Sì	Peptidasi	Mg
Fenolossidasi	Sì	Fosfatasi	Mg
Xantina ossidasi	Mo	Fosfoglucochinasi	Mg
Nitrato reduttasi	Mo	Arginasi	Mn
Aldeide ossidasi	Mo	Fosfoglucomutasi	Mn
Peptidasi	Co	Colinesterasi	Mn

Per quanto riguarda il ruolo dei metalli nell'azione attivante degli enzimi, i dati disponibili indicano che in alcuni casi gli ioni metallici (Co 2+, Mg 2+, Zn 2+, Fe 2+) svolgono le funzioni di gruppi prostetici di enzimi. In altri casi contribuiscono all'adesione del substrato al sito attivo e alla formazione di un complesso enzima-substrato. Ad esempio, gli ioni Mg 2+, attraverso un gruppo fosfato caricato negativamente, assicurano l'aggiunta di esteri monofosforici di sostanze organiche al centro attivo delle fosfatasi che catalizzano l'idrolisi di questi composti. In alcuni casi il metallo si combina con il substrato, formando il vero substrato su cui agisce l'enzima. In particolare gli ioni Mg 2+ attivano la creatina fosfochinasi grazie alla formazione del vero substrato e del sale di magnesio dell'ATP. Infine, esiste evidenza sperimentale della partecipazione diretta dei metalli (ad esempio, gli ioni Ca 2+ nella molecola dell'amilasi salivare) nella formazione e stabilizzazione del centro attivo e dell'intera struttura terziaria della molecola enzimatica. Va anche notato che i metalli spesso svolgono un ruolo di modulatori allosterici (vedi Fig. 59). Interagendo con il centro allosterico, un tale metallo (modulatore) contribuisce alla formazione della configurazione spaziale più favorevole dell'enzima e del complesso attivo enzima-substrato.

Gli anioni a concentrazioni fisiologiche sono generalmente inefficaci o hanno scarso effetto attivante sugli enzimi. Le eccezioni sono la pepsina, alcune ossidoreduttasi attivate dagli anioni, nonché l'amilasi salivare, che catalizza l'idrolisi dell'amido, la cui attività è aumentata dagli ioni cloro, e l'adenilato ciclasi, che viene attivata dagli anioni alogeno.

Inibitori È consuetudine chiamare sostanze che provocano l'inibizione parziale o completa delle reazioni catalizzate dagli enzimi. Poiché gli enzimi sono proteine, qualsiasi agente che causa la denaturazione delle proteine (calore, acidi, alcali, sali di metalli pesanti) porta all'inattivazione dell'enzima. Tuttavia, tale inattivazione è relativamente non specifica. Non è correlato al meccanismo d'azione degli enzimi. Un gruppo molto più ampio è costituito dai cosiddetti inibitori specifici, che agiscono su un enzima o su un gruppo di enzimi correlati. La ricerca su questi inibitori è importante per una serie di ragioni.

Innanzitutto, gli inibitori possono fornire preziose informazioni sulla natura del sito attivo dell'enzima, nonché sui suoi gruppi funzionali e sui legami chimici che assicurano la formazione del complesso enzima-substrato. Sono note sostanze che legano specificamente l'uno o l'altro gruppo in una molecola enzimatica, escludendola dalla sfera di una reazione chimica. In particolare, lo iodoacetato ICH 2 -COOH, la sua ammide ed estere etilico, il paracloromercuribenzoato ClHg - C 6 H 4 -COOH e altri reagenti entrano relativamente facilmente in legami chimici con alcuni gruppi SH di enzimi. Se tali gruppi sono essenziali per l'atto di catalisi, l'aggiunta di tali inibitori porta ad una completa perdita dell'attività enzimatica:

R-SH + ICH 2 -COOH --> HI + R-S-CH 2 -COOH

Numerosi altri enzimi (colinesterasi, trypsin e chimotripsina) sono fortemente inibiti da alcuni composti organofosforici, in particolare dal diisopropilfluorofosfato (DFP), a causa del blocco del gruppo ossidrile chiave della serina nel sito attivo (vedi sopra).

In secondo luogo, gli inibitori hanno trovato ampio utilizzo in enzimologia nello studio della natura di molteplici forme di enzimi e isoenzimi che differiscono non tanto nella mobilità elettroforetica quanto nella differenza nelle reazioni allo stesso inibitore.

Con l'aiuto di inibitori che disattivano selettivamente le singole fasi di un processo metabolico a più fasi, è possibile determinare con precisione la sequenza delle reazioni chimiche e la natura degli enzimi coinvolti. In particolare, in questo modo, con l'uso di iodoacetato, fluoro e altri inibitori, è stata decifrata la via glicolitica delle trasformazioni redox del glucosio in acido lattico nel tessuto muscolare (vedi Metabolismo dei carboidrati), che prevede 11 stadi che coinvolgono 11 enzimi e 10 intermedi metaboliti.

Il meccanismo d'azione di molte tossine e veleni sul corpo si basa sull'inibizione degli enzimi. Pertanto, è noto che in caso di avvelenamento da acido cianidrico, la morte avviene a causa della completa inibizione degli enzimi respiratori (citocromo ossidasi), in particolare delle cellule cerebrali. L'effetto tossico di alcuni insetticidi sull'organismo umano e animale è dovuto all'inibizione dell'attività della colinesterasi, un enzima che svolge un ruolo primario nell'attività del sistema nervoso.

La chemioterapia razionale - l'uso consapevole dei farmaci in medicina, dovrebbe basarsi su un'accurata conoscenza del meccanismo della loro azione, della biosintesi degli enzimi o del loro lavoro nel corpo. A volte il trattamento delle malattie umane prevede l'uso di inibitori selettivi. Pertanto, l'inibitore della tripsina, della chimotripsina e della callicreina, il trasilolo, è ampiamente utilizzato nel trattamento della pancreatite acuta. L'effetto inibitorio selettivo sugli enzimi di alcuni composti naturali e sintetici (i cosiddetti antimetaboliti) costituisce attualmente la base per lo sviluppo di metodi efficaci per la sintesi di farmaci chemioterapici. Questo percorso apre ampie possibilità di regolare sia la sintesi degli enzimi che l'intensità del metabolismo.

Tipi di inibizione. Sebbene il meccanismo d’azione della maggior parte degli inibitori non sia chiaro, di solito viene fatta una distinzione tra inibizione reversibile e irreversibile. Se una molecola inibitrice provoca cambiamenti permanenti o modifiche dei gruppi funzionali dell'enzima, questo tipo di inibizione viene definita irreversibile. Più spesso, tuttavia, si verifica un'inibizione reversibile, che può essere studiata quantitativamente sulla base dell'equazione di Michaelis-Menten. L'inibizione reversibile, a sua volta, si divide in competitiva e non competitiva, a seconda che sia possibile o meno superare l'inibizione della reazione enzimatica aumentando la concentrazione del substrato. Nel secondo caso, l'aumento della concentrazione del substrato non modifica il grado di inibizione enzimatica.

L'inibizione competitiva può essere causata da sostanze che hanno una struttura simile al substrato, ma leggermente diversa dalla struttura del substrato reale. Un classico esempio di questo tipo di inibizione è l'inibizione dell'attività della succinato deidrogenasi da parte dell'acido malonico. Questo enzima catalizza l'ossidazione deidrogenando l'acido succinico in acido fumarico secondo lo schema:

Se al terreno viene aggiunto acido malonico (inibitore), a causa della sua somiglianza strutturale con il vero substrato acido succinico (presenza di due degli stessi gruppi carbossilici ionizzati), reagirà con il centro attivo per formare un inibitore enzimatico complesso (vedi diagramma), tuttavia, in questo caso non si verifica il trasferimento di idrogeno dal malonato. Poiché le strutture del substrato - acido succinico e dell'inibitore - malonato sono ancora leggermente diverse, competono per legarsi al sito attivo e il grado di inibizione sarà determinato dal rapporto tra le concentrazioni di malonato e succinato, e non da la concentrazione assoluta dell'inibitore. Questo tipo di inibizione è talvolta chiamata inibizione dell'antagonismo metabolico (Fig. 56).

In forma generale, la reazione tra un inibitore ed un enzima può essere rappresentata dalla seguente equazione:

Il complesso risultante, chiamato complesso enzimatico-inibitore (EI), a differenza dell'ES, non si decompone per formare prodotti di reazione. La costante di dissociazione del complesso EI o costante inibitoria (K 1) può, seguendo la teoria di Michaelis-Menten, essere determinata come il rapporto tra le costanti delle reazioni inverse e dirette:

cioè, la costante inibitoria è direttamente proporzionale al prodotto della concentrazione dell'enzima e dell'inibitore e inversamente proporzionale alla concentrazione del complesso EI.

Il metodo dell'inibizione competitiva ha trovato ampia applicazione nella pratica medica. È noto, ad esempio, che i farmaci sulfamidici vengono utilizzati per trattare alcune malattie infettive causate da batteri. Si è scoperto che questi farmaci sono strutturalmente simili all'acido para-aminobenzoico, che la cellula batterica utilizza per sintetizzare l'acido folico, che è parte integrante degli enzimi batterici. A causa di questa somiglianza strutturale, la sulfonamide, ad esempio, blocca l'azione dell'enzima spostando l'acido para-aminobenzoico dal complesso con l'enzima che sintetizza l'acido folico, il che porta all'inibizione della crescita batterica.

Alcuni analoghi della vitamina B6 e dell'acido folico, in particolare la desossipiridossina e l'aminopterina (vedi Vitamine), agiscono come inibitori competitivi dei cosiddetti coenzimi (o antivitaminici), inibendo molti processi biochimici nel corpo.

Inibizione non competitiva è causato da sostanze che non hanno alcuna somiglianza strutturale con i substrati e spesso non si legano al centro attivo, ma altrove nella molecola dell'enzima. Il grado di inibizione in molti casi è determinato dalla durata dell'azione dell'inibitore sull'enzima. Con questo tipo di inibizione, a causa della formazione di un legame covalente stabile, l'enzima subisce spesso la completa inattivazione, e quindi l'inibizione diventa irreversibile. Esempi di inibizione non competitiva (inattivazione) sono l'azione dello iodoacetato, del diisopropilfluorofosfato, nonché del dietil-n-nitrofenilfosfato e dell'acido cianidrico, che consiste nel legare e disattivare gruppi funzionali o ioni metallici nella molecola dell'enzima.

Per chiarire la questione del tipo di inibizione, utilizzare l'equazione di Michaelis-Menten, il grafico di Lineweaver-Burk e altre equazioni più avanzate, ad esempio l'equazione di Edie-Hofstee:

v = - K·m (0/[S]) + Vmax

e grafici corrispondenti in coordinate rettilinee. Nei grafici sottostanti, riportati nelle coordinate v e [S], nonché nelle coordinate 1/v e 1/[S], V è la velocità massima di reazione, V 1 è la velocità massima in presenza di un inibitore , K 1 è la costante inibitoria; tutti gli altri simboli sono stati presentati sopra.

Si può notare che con un'inibizione di tipo competitivo (Fig. 57), l'inibitore aumenta il valore di K m (di una quantità pari alla differenza di lunghezza dei segmenti tagliati dall'asse x), senza influenzare la velocità massima. Ciò significa che ad una concentrazione di substrato sufficientemente elevata [S], l'inibitore viene spostato dalle molecole di substrato del complesso EI. Con l'inibizione non competitiva (Fig. 58), l'inibitore riduce la velocità massima. Se il valore di Km non diminuisce allora si parla di inibizione completamente non competitiva. Un tipo simile di inibizione si verifica durante la formazione di complessi EI e (o) EIS inattivi e difficili da dissociare. Spesso, però, esiste un tipo misto di inibizione (a volte chiamato tipo parzialmente non competitivo), in cui una diminuzione della Vmax è combinata con un aumento della Km. Ciò significa che il complesso EI conserva un'attività parziale, cioè la capacità di formare un complesso ternario intermedio EIS, in cui il substrato subisce una trasformazione catalitica ritardata. In rari casi, il grado di inibizione dell'attività enzimatica può aumentare con l'aumento della concentrazione del substrato; Per questo tipo di inibizione è stato proposto il termine piuttosto impreciso non competitivo (dall'inglese uncompetitive). Uno dei meccanismi di tale inibizione è dovuto alla possibilità di combinare l'inibitore con il complesso ES per formare un complesso ESI ternario inattivo o che reagisce lentamente.

Pertanto, analizzando graficamente le velocità di reazione enzimatica in funzione delle concentrazioni di substrato, si possono ottenere preziose informazioni sulla cinetica delle reazioni enzimatiche, illuminando il possibile meccanismo della catalisi enzimatica.

Regolazione dell'attività enzimatica

È stato affermato sopra che una delle proprietà uniche degli organismi viventi è la straordinaria capacità di bilanciare i processi catabolici (biodegradativi) e anabolici (biosintetici). Sebbene i processi di sintesi, decomposizione e interconversione di centinaia e migliaia di sostanze diverse avvengano contemporaneamente nelle cellule, esistono molti meccanismi di regolazione che garantiscono la costanza dell'ambiente interno del corpo. Alcuni di questi meccanismi di regolazione, tra i quali un ruolo importante è giocato dai meccanismi che regolano l'attività enzimatica, saranno discussi di seguito.

Influenza della legge di azione di massa. In una reazione chimica reversibile catalizzata da un enzima, ad esempio A + B C + D, la concentrazione dei componenti della reazione e, di conseguenza, la direzione della reazione sarà regolata dall'influenza della legge di azione di massa. In particolare si può osservare nella reazione di transaminazione reversibile catalizzata dall'alanina aminotransferasi:

Alanina + α-chetoglutarato Piruvato + Glutammato.

Questo tipo di regolazione ovviamente gioca solo un ruolo limitato, poiché in condizioni reali la reazione procede solitamente in una direzione, poiché i prodotti risultanti possono rivelarsi substrati per l'azione di altri enzimi e vengono rimossi dalla reazione; in questi casi si instaura uno stato stabile (stazionario) anziché un vero equilibrio.

Variazione della quantità di enzima. Nei batteri, il fenomeno della sintesi indotta degli enzimi è stato ben studiato quando vengono coltivati in un mezzo in cui l'unica fonte di carbonio ed energia è l'uno o l'altro carboidrato, ad esempio il glucosio. La sostituzione del glucosio nel mezzo con il lattosio porta alla sintesi indotta o adattata (dopo un breve periodo di latenza) dell'enzima galattosidasi (programmato dal gene del lattosio, vedere Sintesi proteica), che scompone il lattosio in glucosio e galattosio. Nei tessuti animali, una sintesi così rapida di enzimi si osserva relativamente meno frequentemente, e il meccanismo che induce la sintesi è stato studiato solo per un piccolo numero di enzimi (tirosina transaminasi, serina e treonina deidratasi, triptofano pirrolasi, ecc.). Tuttavia, quando alcuni veleni, sostanze cancerogene, alcaloidi, insetticidi, ecc. entrano nel corpo, dopo pochi giorni si osserva un forte aumento dell'attività (rispettivamente, della quantità) degli enzimi: idrossilasi del reticolo endoplasmatico liscio delle cellule epatiche; ossidare sostanze estranee in prodotti non tossici per il corpo. D'altra parte, sono stati descritti casi in cui, sotto l'azione di tali idrossilasi, le sostanze estranee vengono convertite nel corpo in composti più tossici. Questo fenomeno, opposto alla disintossicazione, è chiamato sintesi letale.

Proenzimi. Gli enzimi proteolitici del tratto gastrointestinale e del pancreas sono sintetizzati in forma inattiva, sotto forma di proenzimi (zimogeni). La regolazione in questi casi si riduce alla conversione dei proenzimi in enzimi attivi sotto l'influenza di agenti specifici. Pertanto, la tripsina viene sintetizzata nel pancreas sotto forma di tripsinogeno. Quest'ultimo viene convertito in tripsina attiva nell'intestino sotto l'azione di un altro enzima proteico: l'enterochinasi, scoperto per la prima volta nel laboratorio di I. P. Pavlov. È stato stabilito che l'effetto attivante dell'enterochinasi si riduce alla scissione dell'esapeptide dal tripsinogeno, portando alla formazione della struttura terziaria nativa della tripsina e del suo centro attivo (vedi sopra); si osserva anche l'autocatalisi. La conversione del pepsinogeno inattivo in pepsina attiva avviene autocataliticamente a seguito di una proteolisi limitata in presenza di HC1 ed è anche associata alla scissione dal primo inibitore specifico di natura polipeptidica (vedi Metabolismo delle proteine semplici). La sintesi delle proteinasi in forma inattiva e di una serie di altre proteine precursori inattive ha ovviamente un certo significato biologico, poiché impedisce la distruzione delle cellule dell'organo in cui si formano i proenzimi.

Modificazione chimica dell'enzima.È stato indicato sopra (vedi Chimica delle Proteine) che un certo numero di proteine subiscono modifiche postsintetiche durante la formazione della loro struttura terziaria. Si è scoperto che gli enzimi chiave del metabolismo energetico - fosforilasi, glicogeno sintetasi, ecc. - sono controllati anche dalla fosforilazione e defosforilazione effettuata da enzimi specifici - proteina chinasi e proteina fosfatasi, il cui livello di attività è a sua volta regolato dagli ormoni (vedi Metabolismo dei carboidrati). Il livello di attività degli enzimi chiave e, di conseguenza, l'intensità dei processi metabolici sarà determinato dal rapporto tra le forme fosforilate e defosforilate di questi enzimi.

Regolazione dell'attività enzimatica secondo il principio del feedback. In molte reazioni strettamente biosintetiche, il principale tipo di regolazione della velocità di un processo enzimatico multifase è l'inibizione del feedback, quando il prodotto finale della catena biosintetica sopprime l'attività dell'enzima che catalizza la prima fase.

Supponiamo che nelle cellule avvenga un processo biosintetico a più stadi, ciascuno dei quali è catalizzato dal proprio enzima:

La velocità di una tale sequenza totale di reazioni è in gran parte determinata dalla concentrazione del prodotto finale (P), il cui accumulo al di sopra del livello consentito ha un potente effetto inibitorio sulla prima fase del processo, rispettivamente, sull'enzima E 1.

L'esistenza di un tale meccanismo per il controllo dell'attività enzimatica da parte dei metaboliti è stata dimostrata per la prima volta in E. coli studiando la sintesi di isoleucina e citidina trifosfato (CTP). Si è scoperto che l'isoleucina, che è il prodotto finale, sopprime selettivamente l'attività della treonina deidratasi, che catalizza la prima fase del processo di conversione della treonina in isoleucina, che comprende cinque reazioni enzimatiche. Allo stesso modo, la CTP, come prodotto finale della via biosintetica, ha un effetto inibitorio sul primo enzima (aspartato transcarbamilasi), regolando così la propria sintesi. Questo tipo di inibizione è chiamata inibizione a feedback o retroinibizione. La sua esistenza è stata dimostrata in tutti gli organismi viventi e attualmente è considerata uno dei principali tipi di regolazione dell'attività enzimatica e del metabolismo cellulare in generale 1. (1 È opportuno precisare che la velocità di reazione (così come l’attività enzimatica) nei processi puramente biodegradativi (catabolici) è regolata da prodotti intermedi indicatori dello stato energetico della cellula (nucleotidi purinici, pirofosfato, fosfato inorganico, ecc.) .)

D'altra parte, nei processi anfibolici (vedi Introduzione al metabolismo e all'energia), che svolgono contemporaneamente funzioni biosintetiche e biodegradative 2, l'esistenza della regolazione è stata dimostrata sia dal tipo di retroinibizione che dai macroerg - indicatori dello stato energetico del cellula. (2 I processi anfibolici comprendono vie come la glicolisi, la glicogenolisi, il ciclo dell'acido tricarbossilico, la via dell'esoso monofosfato, la transaminazione degli aminoacidi (vedi Metabolismo)). Per i processi anfibolici, un tipo unico di regolazione, peculiare solo a loro, è inoltre l'attivazione da parte di un precursore, quando il primo metabolita in un percorso a più fasi attiva l'enzima che catalizza l'ultimo stadio. Pertanto è stato dimostrato l'effetto attivante del glucosio-6-fosfato, che è un precursore del glicogeno, sull'enzima glicogeno sintetasi.

Tipi simili di inibizione da parte del prodotto finale e attivazione da parte del primo prodotto sono caratteristici degli enzimi allosterici (regolatori) (vedi sopra), quando l'effettore, strutturalmente diverso dal substrato, si lega a un centro speciale (allosterico) della molecola dell'enzima, spazialmente distanti dal centro attivo. Pertanto, è comune distinguere tra il tipo di regolazione allosterica, che include sia l'inibizione allosterica che l'attivazione allosterica. Le interconversioni degli enzimi allosterici attivi e inattivi in una forma semplificata, così come i cambiamenti conformazionali osservati durante l'attacco del substrato e degli effettori, sono presentati in Fig. 59.

Si può vedere che l'attaccamento di un effettore negativo al centro allosterico provoca cambiamenti significativi nella configurazione del centro attivo della molecola dell'enzima e, di conseguenza, la perdita dell'affinità dell'enzima per il suo substrato (formazione di un complesso inattivo) .

Le interazioni allosteriche si manifestano nella natura delle curve della dipendenza della velocità di reazione iniziale dalla concentrazione del substrato o dell'effettore, in particolare nella forma a S delle curve (deviazione dalla curva iperbolica di Michaelis-Menten). Ciò significa che il legame di una molecola di substrato facilita il legame di una seconda molecola al centro allosterico, aumentando così la velocità della reazione. Inoltre, gli enzimi regolatori (allosterici) sono caratterizzati da una dipendenza non lineare della velocità di reazione dalla concentrazione dell'enzima.

Altri tipi di regolazione dell'attività enzimatica. Esistono numerosi altri meccanismi che controllano la velocità dei processi metabolici e l'attività degli enzimi intracellulari. Tali meccanismi possono includere la competizione tra enzimi per un substrato comune, l'arresto dell'attività di uno degli enzimi (in molteplici forme di enzimi), l'influenza delle concentrazioni di cofattori e della loro forma (specialmente ioni metallici) e il fenomeno della compartimentazione. Il meccanismo di compartimentazione svolge apparentemente un importante ruolo biologico, separando spazialmente gli enzimi dai loro substrati attraverso biomembrane (ad esempio, enzimi lisosomiali: proteinasi, fosfatasi, ribonucleasi e altri enzimi idrolitici, da sostanze su cui agiscono nel citoplasma) o tra loro incompatibili nel metabolismo processi allo stesso tempo. Un esempio di questi ultimi possono essere le vie di sintesi degli acidi grassi, che avvengono principalmente nella frazione solubile del citoplasma, e le vie di degradazione degli acidi grassi, concentrate nei mitocondri.

Determinazione dell'attività enzimatica

Determinare il contenuto quantitativo di enzimi negli oggetti biologici presenta alcune difficoltà poiché, salvo rare eccezioni, gli enzimi nei tessuti sono presenti in concentrazioni trascurabilmente piccole. Pertanto, la quantità di enzimi viene giudicata dalla velocità della reazione catalizzata, in determinate condizioni di misurazione concordate. In condizioni ottimali di temperatura, pH dell'ambiente e completa saturazione dell'enzima con il substrato, la velocità è proporzionale alla concentrazione dell'enzima. La velocità di una reazione enzimatica è giudicata dalla velocità di perdita del substrato o dalla velocità di formazione del prodotto di reazione.

Per esprimere la concentrazione di un enzima, la Commissione sugli Enzimi dell'Unione Biochimica Internazionale raccomanda un'unità standard (E). Per unità di qualsiasi enzima si intende la quantità che, in condizioni ottimali, catalizza la conversione di 1 µmol di substrato al minuto (μmol/min). È stata proposta una nuova definizione dell'unità internazionale dell'enzima catal (kat), corrispondente alla quantità di enzima capace di provocare la conversione di 1 mole di substrato in un prodotto in 1 s (1 mol/s). Il rapporto tra l'unità internazionale (E) e il katal può essere espresso come segue:

oppure 1 E=1 µmol · min -1 = (1/60) µmol · s -1 = (1/60) µkat = 16,67 nkat. Pertanto, 1E dell'enzima corrisponde a 16,67 ncat.

Si consiglia inoltre di misurare le unità enzimatiche a 25°C, il pH ottimale e la concentrazione del substrato superiore alla concentrazione di saturazione. In questi casi la velocità corrisponde ad una reazione di ordine zero rispetto al substrato e dipenderà solo dalla concentrazione dell'enzima.

Per esprimere l'attività di un enzima si utilizza la definizione di attività specifica e molecolare. L'attività specifica di un enzima è solitamente espressa come il numero di unità di attività enzimatica per 1 mg di proteina (o il numero di catali per 1 kg di proteina attiva). Il numero di molecole di substrato che vengono convertite da una molecola di enzima al minuto è solitamente chiamato numero di rivoluzioni o attività molecolare. Pertanto, una molecola di catalasi eritrocitaria è in grado di scomporre 5 · 10 6 molecole di perossido di idrogeno 1 in 1 minuto. (1 Perché 1 atomo di ferro inorganico, che catalizza anche la decomposizione dell'H 2 O 2 , possa scomporre il numero di molecole di H 2 O 2 scomposte dalla catalasi in 1 s, impiegherebbe più di 300 anni. Questo esempio è una chiara prova di una delle principali proprietà degli enzimi: la loro elevata attività catalitica.)

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prima inseminazione numero 7 6% 50,0±13,3 40,1±12,6 in 90 giorni. numero 12 11% 85,8±9,3 73,3111,4 "inattivazione<...>prima inseminazione numero 23 16% 53,5±7,6 42,1±8,0 in 90 giorni. numero 39 23% 90,7±4,4* 71,1±7,4* inattivazione

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SVILUPPO DI NUOVI MODI PER LA STABILIZZAZIONE E IL CONTROLLO DEI VINI ABSTRACT DIS. ... DOTTORE IN SCIENZE TECNICHE

ORDINE TUTTO SINDACALE DELLA BANDIERA ROSSA DEL LAVORO ISTITUTO DI RICERCA PER LA VINIFICAZIONE E LA VIGNETO "MAGARACH"

Obiettivo del lavoro. Metodologicamente, la soluzione al problema della stabilizzazione dei vini si basava su un approccio sistematico alla valutazione della potenziale instabilità dei vini rispetto ai singoli tipi di torbidità e alle loro complesse manifestazioni, con il successivo sviluppo di nuovi metodi per stabilizzare i vini da questa base.

1967), sull'All-Union Sozetsanip sulla biosintesi degli enzimi da parte dei microrganismi e il loro utilizzo nelle popolazioni<...>Quando il contenuto di calcio nel terreno è pari a 20-30 mg/giorno, l'attività enzimatica viene ridotta della metà.<...>enzimi.<...>Entro 21 giorni di funzionamento continuo del reattore, l’attività enzimatica è diminuita della metà.<...>COME. 536192 (URSS) Metodo di immobilizzazione degli enzimi (Pavlenko N.

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B-GLUCOSIDASI DEL FUNGO GEETRIOHWIS CAADIDNE ZS ABSTRACT DIS. ...CANDIDATO DI SCIENZE BIOLOGICHE

M.: ACCADEMIA DELLE SCIENZE DELL'URSS ORDINE DI LENIN ISTITUTO DI BIOCHIMICA IN NOME A A. N. BACH

Scopo e obiettivi dello studio. Lo scopo di questo lavoro è stato quello di studiare molteplici forme di b-glucosidasi nel preparato enzimatico industriale "Cellocandin I 10x", ottenuto dal filtrato del liquido di coltura del fungo degradatore della cellulosa Geo trichura oandidum ZS.

enzima lekule, la composizione della componente carboidratica di una molecola.<...>La resa dell'enzima era di circa il 9% in attività e 0,13? dalle proteine.<...>L'enzima isolato è un polisaccaride (arabogdEsuroEoxylan<...>Vtsroo Bseseyazn. soyoshch. lo enzimi dei gastroorganismi. Minsk, 1978, ottobre, astratto. relazione, pag. 76.4.<...>"Metodi per ottenere enzimi altamente purificati." -Vilnius, 1973, punta. relazione, pp.94-95. 5.

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EFFICACIA DELL'UTILIZZO DI INDICATORI BIOCHIMICI DEL SANGUE NELLA VALUTAZIONE DELLE QUALITÀ DI ALLEVAMENTO DEGLI SRAM DI RAZZA KARAKUL ESTRATTO DI DIS. ...CANDIDATO DI SCIENZE AGRICOLE

ISTITUTO DI RICERCA TUTTA UNIONALE SULLA ZOOTECNIA

Lo scopo di questo studio è sviluppare un metodo scientificamente basato per valutare la qualità degli arieti Karakul per la qualità della loro prole selezionando gli animali in base alla loro individualità biochimica.

Prima di determinare l'attività degli enzimi Copyright JSC "CDB "BIBKOM" & LLC "Agenzia Kniga-Service" b.<...>Di queste, 6 teste con elevata attività dell'enzima aspartato aminotransferasi, 6 teste con attività media e 6 teste<...>L'attività degli enzimi del sangue di montone dipendeva anche dall'età degli YAWNERS.<...>Attività enzimatica 1Somma di Nukyaev" ?<...>Segni di sviluppo della pecora Karakul nei Terrier, che possono includere l'infusione degli enzimi aspartato

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COMPATIBILITÀ DEI GENOMI DI ALCUNE SPECIE DI GRANO TETRAPLOIDE E TEXAPLOIDE CON IL CITOPLASMA DI T. TIMOPHEEVI ABSTRACT DIS. ...CANDIDATO DI SCIENZE BIOLOGICHE

M.: ORDINE DI LENIN DI MOSCA E ORDINE DELLA BANDIERA ROSSA DEL LAVORO ACCADEMIA AGRICOLA INtitolata A K. A. TIMIRYAZEV

Obiettivi: 1. Studiare la compatibilità dei genomi di alcune specie di frumento esaploide e tetraploide con il citoplasma di T. timopheevi e allo stesso tempo cercare di isolare l'effetto e le interazioni dei genomi stessi; 2. Studio della meiosi e della microsporogenesi nelle forme fertili e nelle forme ottenute da incroci; Vista della linea X del CMS. 3. Condurre uno studio citochimico degli organi generativi delle forme fertili e dei loro analoghi sterili (nel caso dell'effetto sterilizzante del citoplasma di T. timopheevi) in alcuni tipi di grano.

1.0 1.5 2.0 1.0. 1.5 1.2 1.1 Copyright JSC Central Clinical Hospital BIBKOM & LLC Kniga-Service Agency Attività enzimatica<...>Enzimi.<...>enzimi.<...>L'attività enzimatica è stata determinata nel polline, nell'ovaio e nello stigma. Perossidasi.<...>Una diminuzione del contenuto di numerose sostanze ed enzimi nelle ovaie e negli stimmi dei pistilli delle forme sterili di grano è

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DATI COMPARATIVI SULL'ATTIVITÀ DI ALCUNI ENZIMI GLICOLITICI NELLO SPERMA DI TORO E CINGHIALE ABSTRACT DIS. ...CANDIDATO DI SCIENZE BIOLOGICHE

ISTITUTO VETERINARIO DI LVIV

Questo articolo presenta i risultati di uno studio comparativo sull'attività dell'adenosina trifosfatasi, fosfoesoisomerasi, fosfoglucomutasi, aldolasi e fruttosio-1,6-bifosfatasi nello sperma di toro e cinghiale, nonché l'influenza del regime di sfruttamento sessuale dei produttori sull'attività degli enzimi studiati.

Anche la distribuzione degli enzimi tra cellule germinali e plasma non è la stessa.<...>Questo enzima si trova nello sperma di entrambe le specie animali.<...>(L’enzima P è diminuito.<...>Alto contenuto di enzima ATPasi in 10.<...>L'effetto dell'insulina sull'attività di alcuni enzimi nello sperma del toro.

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IDENTIFICAZIONE E ALCUNE CARATTERISTICHE DEL COMPLESSO PROTEOLITICO DEGLI ACTINOMICETI ABSTRACT DIS. ...CANDIDATO DI SCIENZE BIOLOGICHE

Obiettivi di lavoro. Questo lavoro è dedicato allo studio di alcune caratteristiche del complesso proteolitico degli attinomiceti

.; :,"Questi enzimi svolgono un ruolo regolatore critico nel coordinare il turnover (sintesi decomposizione £r=5<...>";. "Le fonti degli enzimi sono oligoidi ""v7 ;>^ ".;"." -" .<...>La purificazione preliminare del complesso enzimatico del latte bollente è stata effettuata secondo il metodo generalmente accettato<...>Il valore di pH ottimale per la manifestazione di ".-.: attività enzimatica. . . " " " " " ".<...>actinomia-.;..^ i laboratori, come enzimi simili di altri microrganismi, avevano intervalli più ampi

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ATTIVITÀ BIOLOGICA DEI SUOLI SODD-PODZOL E SUO CAMBIAMENTO SOTTO L'INFLUENZA DELLE MISCELE MINERALI DI TORBA ASTRATTO DIS. ...CANDIDATO DI SCIENZE AGRICOLE

ORDINE BIELORUSSO DELLA BANDIERA ROSSA DEL LAVORO ACCADEMIA AGRICOLA

ATTIVITÀ BIOLOGICA DEI SUOLI SODD-PODZOL E SUO CAMBIAMENTO SOTTO L'INFLUENZA DELLE MISCELE MINERALI DI TORBA

Dipendenza dell'attività enzimatica del suolo dalle condizioni ambientali L'attività enzimatica dipende da una serie di fattori<...>È qui che si riflette una delle proprietà caratteristiche degli enzimi, la labilità.<...>Tuttavia, se per gli enzimi del corpo queste dipendenze sono completamente chiare, allora per gli enzimi del suolo<...>Le condizioni ambientali hanno un impatto significativo sull’attività enzimatica nel suolo.<...>Al contrario, una diminuzione dell'umidità del suolo porta ad una diminuzione dell'attività dei suoi enzimi.

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RAZIONALITÀ FISIOLOGICA PER LA COMBINAZIONE DELLA NUTRIZIONE FOGLIARE DELLE PIANTE AGRICOLE CON IL LORO DISERBO CHIMICO (SULL'ESEMPIO DEL MAIS E DEL MIGLIO) ABSTRACT DIS. ...CANDIDATO DI SCIENZE BIOLOGICHE

Abbiamo tentato di studiare le basi fisiologiche della combinazione dell'alimentazione fogliare delle piante agricole con il loro diserbo chimico in stretta connessione con questioni di biochimica, biofisica e coltivazione delle piante. Questa tesi è dedicata alla teoria e alla pratica dell'uso congiunto di fertilizzanti minerali ed erbicidi nelle colture di mais e miglio.

13,9 14,8 L « 100 135,1 143,3 152,6 Gli esperimenti hanno mostrato anche un aumento dell'attività di altri enzimi respiratori<...>Nei nostri esperimenti, l'intensità della respirazione corrispondeva, di regola, all'attività degli enzimi ossidativi<...>In futuro, l'attività di questi enzimi aumenta: aggiungendo fertilizzante azotato alla soluzione erbicida<...>attenua l'effetto iniziale dell'acido 2,4-diclorofenossiacetico sull'attività degli enzimi ossidativi<...>piante: "scambio idrico, fotosintesi, sintesi di fitocromi, respirazione e attività di alcuni enzimi ossidativi

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ALCUNI INDICATORI DEL METABOLISMO DEI CARBOIDRATI NEI PULCINI IN DIPENDENZA DELL'ETÀ E DELLO STATO FISIOLOGICO DEL CORPO ABSTRACT DIS. ...CANDIDATO DI SCIENZE BIOLOGICHE

ISTITUTO VETERINARIO DI KHARKIV

Questo articolo presenta i risultati di studi su alcuni aspetti del metabolismo dei carboidrati nei polli Russian White alla fine dell'embriogenesi e durante un periodo relativamente lungo della loro ontogenesi postnatale.

Dinamica legata all'età del contenuto dei principali metaboliti dei carboidrati e dell'attività degli enzimi dei carboidrati<...>Il metabolismo dei carboidrati nell'ovidotto, nonché l'attività degli enzimi corrispondenti<...>L'attività enzimatica è stata espressa in μg di fosforo per 100 mg di tessuto.<...>Pertanto, durante l'embriogenesi, l'attività enzimatica è relativamente bassa.<...>E 'noto. che questo enzima svolge anche un ruolo nella sintesi del glicogeno./. .

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METODI DI IMMUNIZZAZIONE CHIMICA DEL TABACCO AL MORCHIO NERO ESTRATTO DI DIS. ...CANDIDATO DI SCIENZE BIOLOGICHE

ORDINE DI KHARKIV DELLA BANDIERA ROSSA DEL LAVORO ISTITUTO AGRICOLO IN NOME A V. V. DOKUCHAEV

METODI PER L'IMMUNIZZAZIONE CHIMICA DEL TABACCO ANTIMORCHIO NERO

Il trattamento pre-semina attiva gli enzimi VV nelle piante, che hanno un effetto positivo sul flusso di<...>Quando colpiti dal marciume radicale nero, si verifica un cambiamento nell'attività degli enzimi respiratori nelle piante

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MUSCOLO DEL CONIGLIO GLICOGENE FOSFORILASI - STRUTTURA QUATERNARIA E PROPRIETÀ REGOLAMENTARI ABSTRACT DIS. ... DOTTORE IN SCIENZE BIOLOGICHE

M.: ORDINE DELL'ISTITUTO DI BIOCHIMICA LENIN INtitolato A. N. BACH

Il presente studio aveva principalmente i seguenti obiettivi. 1. Studio delle condizioni per la dissociazione delle fosforilasi B e A dai muscoli del coniglio in subunità al fine di ottenere ulteriori informazioni sulla struttura quaternaria dell'enzima, sulle proprietà delle subunità e sulla natura delle connessioni tra loro. 2. Per chiarire la questione della partecipazione del piridossal-5-fosfato nel mantenimento della struttura quaternaria della fosforilasi.

La fosforilasi appartiene alla classe degli enzimi regolatori con una "... struttura quaternaria.<...>Ciò può essere spiegato dall'effetto specifico della cisteina sulla struttura dell'enzima.<...>Il terzo tipo di strati si osserva principalmente sui preparati enzimatici preparati con barbabietola rossa.<...>Attività ottica indotta di alcuni enzimi piridossal.<...>Modificazione chimica degli enzimi come uno dei modi per regolare la loro attività.

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È stato effettuato uno studio sulla cinetica di inattivazione termica della glutatione perossidasi di tipo I, enzima che svolge un ruolo chiave nel sistema di difesa antiossidante dell'organismo. È stato dimostrato che alla temperatura di 37°C la glutatione perossidasi oligomerica viene inattivata mediante un meccanismo monomolecolare. È stato proposto un metodo efficace per stabilizzare l'enzima utilizzando polielettroliti di diversa natura.

È stato a questo valore di pH che sono stati studiati i modelli cinetici di inattivazione enzimatica<...> <...>È stato accertato che in presenza di eccessi di 1, 10 e 100 volte dei suddetti polimeri, l'inattivazione dell'enzima<...> <...>

STUDIO DEL MECCANISMO DI INATTIVAZIONE FOTODINAMICA DEGLI ENZIMI ASTRATTI DIS. ...CANDIDATO DI SCIENZE BIOLOGICHE

Lo scopo di questo studio era di testare sperimentalmente questa ipotesi, dimostrare l'esistenza di danni nascosti al substrato proteico durante la PDE, studiarne la natura e il contributo al danno complessivo, nonché studiare l'efficacia del danno fotodinamico alle proteine (resa quantistica) , una questione praticamente non sviluppata, ma comunque importante per chiarire sia il meccanismo della reazione fotodinamica della cellula che le caratteristiche strutturali del substrato proteico

<...>KONDAKOVA Studio del meccanismo di inattivazione fotodinamica degli enzimi Abstract della tesi<...>L'illuminazione di soluzioni di miosina con blu di metilene nell'aria porta all'inattivazione dell'enzima secondo la legge<...>Il ripristino del colore è accompagnato dalla parziale inattivazione dell'enzima (effetto collaterale dell'ossigeno).<...>A questo scopo, le dipendenze di Vine dall'inattivazione enzimatica sono state studiate in un ampio intervallo di concentrazioni:

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STUDIO DEL MECCANISMO DI INATTIVAZIONE DELLE RADIAZIONI DEGLI ENZIMI ASTRATTI DIS. ... DOTTORE IN SCIENZE BIOLOGICHE

M.: ISTITUTO DI FISICA BIOLOGICA DELL'ACCADEMIA DELLE SCIENZE DELL'URSS

Dal confronto e dall'analisi dei risultati presentati nella tesi, il processo in due fasi di inattivazione delle radiazioni degli enzimi viene presentato come segue (Capitolo 13). Nella prima fase di inattivazione, nella molecola proteica avviene una ridistribuzione della carica elettronica con la formazione e localizzazione di un posto vacante elettronico.

E I D U S STUDIO DEL MECCANISMO DI INATTIVAZIONE DA RADIAZIONE DEGLI ENZIMI Abstract della tesi per concorso scientifico<...>EI DUS STUDIA IL MECCANISMO DI INATTIVAZIONE DA RADIAZIONE DEGLI ENZIMI Abstract della tesi per concorso scientifico<...>Pertanto, per inattivare gli enzimi sia sotto gli effetti “indiretti” che “diretti” delle radiazioni<...>(Danno nascosto durante l'inattivazione delle radiazioni degli enzimi).<...>Partecipazione dell'ossigeno all'inattivazione da radiazioni degli enzimi secchi. Radiobiologia. 4, 44. Eidus L. X. 1964.

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Riepilogo. La resistenza agli antibiotici tra i microrganismi della famiglia delle Enterobacteriaceae è causata da una combinazione di diversi meccanismi, ad esempio la sovrapproduzione di beta-lattamasi, una diminuzione della permeabilità della membrana esterna della cellula microbica (solitamente associata alla perdita di proteine porine), e la presenza di un sistema di efflusso. Un'attenzione particolare meritano le metallo-beta-lattamasi (MBL), la cui presenza determina la resistenza dei microrganismi gram-negativi a tutti gli antibiotici beta-lattamici (in alcuni casi, ad eccezione dell'aztreonam). Attualmente non esistono inibitori MBL di microrganismi resistenti ai carbapenemi approvati per l’uso clinico. La ricerca di efficaci inibitori MBL di microrganismi resistenti ai carbapenemi, approvati per l'uso clinico e che potenziano l'effetto dei carbapenemi, è servita come base per questo studio. Il lavoro si è svolto in 3 fasi: 1) creazione di un sistema modello utilizzando un reagente standard dell'enzima metallo-beta-lattamasi ricombinante di P. aeruginosa, espresso in E. coli, per valutare l'aumento delle concentrazioni minime inibenti (MIC ) di carbapenemi contro ceppi gram-negativi precedentemente sensibili in vitro; 2) valutazione dell'efficacia di promettenti inibitori MBL in presenza dello stesso reagente enzimatico standard; 3) valutazione della capacità degli inibitori identificati di potenziare l'effetto dei carbapenemi contro isolati clinici di microrganismi gram-negativi produttori di MBL, sulla base della MIC e dell'indice di concentrazione inibitoria frazionaria (FIC). Il metodo a scacchiera standard è stato modificato per valutare l'uso combinato di un antibiotico carbapenemico e di un potenziale inibitore della MBL, un farmaco bifosfonato, l'acido etidronico. Utilizzando un reagente standard per l'enzima metallo-beta-lattamasi ricombinante di P. aeruginosa espresso in E. coli, è stato creato un sistema modello che ci consente di valutare le prospettive di nuovi inibitori MBL di microrganismi gram-negativi. È stato rivelato un effetto dose-dipendente dell’aumento del livello MIC di meropenem sulla quantità di reagente MBL nel sistema modello in relazione ai ceppi di riferimento di microrganismi precedentemente sensibili all’antibiotico. L'inattivazione dell'enzima MBL è stata osservata anche con piccole dosi di bifosfonato; gli studi hanno dimostrato un ritardo nella comparsa della fase di crescita logaritmica della coltura test di P. aeruginosa ATCC 27853 fino a 12 ore rispetto al controllo. Allo stesso tempo, dosi massime di acido etidronico di 50.000–100.000 μg/ml hanno inibito completamente la MBL ed è stata osservata l'assenza della fase logaritmica della crescita microbica a causa dell'azione del meropenem a livello del valore di sensibilità di riferimento (2 μg /ml). È stato rivelato un effetto sinergico (indice FIC

L'inattivazione dell'enzima MBL è stata osservata anche con piccole dosi di bifosfonato; gli studi hanno mostrato un ritardo<...>A partire dalla 4a riga, l'intensità dell'inattivazione da parte dell'enzima è diminuita e nell'8a riga l'assenza di<...>A partire dalla 5a fila, l'intensità dell'inattivazione enzimatica è diminuita e nell'8a fila è stata notata una mancanza di crescita<...>Nelle cellule senza acido etidronico è stata osservata la crescita del ceppo in esame a causa dell'inattivazione dell'antibiotico da parte dell'enzima<...>L'inattivazione dell'enzima MBL è stata rilevata anche con piccole dosi di bifosfonato.

LIPASI GERME DI GRANO: PRODUZIONE PREPARATIVA, PROPRIETÀ, REGOLAZIONE DELL'ATTIVITÀ ASTRATTO DIS. ...CANDIDATO DI SCIENZE BIOLOGICHE

UNIVERSITÀ STATALE DI VORONEZH

Lo scopo del lavoro di tesi era quello di ottenere la lipasi del germe di grano in uno stato omogeneo, studiarne le caratteristiche fisico-chimiche, la regolazione dell'attività, nonché lo sviluppo e la giustificazione della conservazione e dell'uso razionali del germe di grano nell'industria alimentare, tenendo conto delle proprietà catalitiche della lipasi.

Determinazione dell'attività enzimatica.<...>l'inattivazione acida e termica è stata studiata nell'intervallo di pH 4-8,5 e temperature 20-60 °C.<...>L'aumento della temperatura a 60 °C ha portato ad un'inattivazione più drammatica dell'enzima: dopo 1 ora di incubazione a<...>Lo studio della cinetica di inattivazione acida ha permesso di calcolare le costanti di velocità di inattivazione negli studi studiati<...>Nella fig. La Figura 3 mostra i grafici di Arrhenius che indicano l'inattivazione termica della lipasi.

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ATTIVITÀ LIPOLITICA DEI PREPARATI COAGULANTI DEL LATTE E SUO RUOLO NELLA FORMAZIONE DELLA QUALITÀ DEL FORMAGGIO ASTRATTO DIS. ...CANDIDATO DI SCIENZE TECNICHE

ISTITUTO TECNOLOGICO DELL'INDUSTRIA DELLA REFRIGERAZIONE DI LENINGRADO

Novità scientifica dell'opera. Per la prima volta è stato sviluppato un sistema di criteri per valutare l'idoneità dei preparati per la coagulazione del latte per la produzione del formaggio in base alle loro proprietà lipolitiche (A.S. No. 1040702 URSS). È stata studiata l'attività lipasica di farmaci di varia origine e la sua dipendenza dal pH e dalla temperatura. È stata studiata la cinetica di inattivazione della coagulazione e delle attività lipolitiche in alcuni farmaci sotto l'influenza della temperatura e dell'irradiazione ultravioletta. È stata stabilita la specificità delle lipasi dei farmaci coagulanti del latte. È stata rivelata una relazione tra i parametri di lipolisi e la qualità dei formaggi.

La cinetica di inattivazione della coagulazione e le attività lipolitiche in alcuni farmaci di seguito<...>Cinetica di inattivazione - misurando l'attività residua degli enzimi (I.B. Berezin, L.L.<...>complesso) e maggiore inattivazione termica dell'enzima a temperature sufficientemente elevate.<...>o inattivazione di enzimi sotto l'influenza dell'irradiazione UV (Tabella 4).<...>Non è stata rilevata alcuna inattivazione evidente degli enzimi lipolitici sotto l'influenza dell'irradiazione ultravioletta

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STUDIO DEL RUOLO DEL FATTORE INFORMAZIONE NELLA FOTOINATTIVAZIONE DELLE PROTEINE ABSTRACT DIS. ...CANDIDATO DI SCIENZE BIOLOGICHE

ISTITUTO DI BOTANICA SPERIMENTALE DELL'ACCADEMIA DELLE SCIENZE DELLA BSSR

Lo scopo di questo lavoro era 1) uno studio sistematico della relazione tra lo stato conformazionale delle molecole proteiche e il livello della loro fosfosensibilità; 2) verifica sperimentale della possibilità di utilizzare energia di eccitazione elettronica, disattivata lungo un percorso non radiativo, per la fotoinattivazione di proteine.

Di norma, la resa quantica dell'inattivazione delle proteine studiate diminuisce con l'aggiunta di sali.<...>Molti autori notano la maggiore stabilità degli enzimi nei complessi enzima-substrato.<...>inattivazione sullo sfondo di protezione e attivazione.<...>L'inattivazione di Y6 appare solo a dosi abbastanza significative di luce Y6.<...>Informazioni sull'effetto protettivo del substrato durante l'inattivazione ultravioletta di alcuni enzimi.

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È stato proposto un biocatalizzatore eterogeneo basato su inulinasi immobilizzata sul sorbente non ionico Stirosorb. È stata effettuata l'inattivazione termica e acida dell'inulinasi libera e immobilizzata. Sono stati calcolati i valori corrispondenti delle costanti di inattivazione. È stato rivelato un aumento della stabilità termica dell'enzima immobilizzato rispetto a quello libero. L'effetto dell'inattivazione termica sulla struttura dell'enzima è stato esaminato mediante spettroscopia IR.

L'inattivazione termica e acida degli enzimi nativi e immobilizzati è stata effettuata mediante termostatazione<...>La Figura 1 mostra la dinamica del processo di inattivazione dell'enzima libero e immobilizzato alle temperature<...>L'inattivazione enzimatica è nella maggior parte dei casi una reazione del primo ordine ed è descritta dall'equazione<...>Per l'enzima immobilizzato è stata notata una diminuzione della costante di inattivazione rispetto all'enzima nativo<...>Gli spettrogrammi dell'enzima dopo inattivazione (70°C) per 30 minuti hanno mostrato un aumento significativo

N. 3 [Bollettino dell'Università di Mosca. Serie 2. Chimica, 2014]

La rivista pubblica articoli sia di personale universitario che di autori di altre organizzazioni in Russia e nel mondo. Le pubblicazioni coprono tutti i rami della chimica.

Sulla base dei dati sul meccanismo di inattivazione enzimatica, sono state sviluppate composizioni di tensioattivi non ionici<...>Sulla base dei dati sul meccanismo di inattivazione dell'enzima antistafilococco LysK, si avvicina a<...>T. 55. N. 3 da cui risulta chiaro che l'inattivazione dell'enzima avviene al primo ordine con una costante di inattivazione<...>I valori delle costanti di inattivazione aumentano significativamente all’aumentare dei rapporti molari PLPEG:enzima<...>Il valore costante di inattivazione dell'enzima in presenza di acido poliacrilico diminuisce approssimativamente

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Utilizzando i metodi di Dixon e la modificazione chimica, è stato rivelato il ruolo del gruppo imidazolico dell'istidina, dei gruppi w-carbossilici degli acidi aspartico e glutammico e dei gruppi sulfidrilici della cisteina nell'idrolisi dei trigliceridi. È stato dimostrato che l'etilendiamminotetraacetato è un inibitore della lipasi non competitivo

il blu dovrebbe portare all'inattivazione dell'enzima, come abbiamo osservato nei nostri esperimenti.<...>Il trattamento della lipasi con ditionitrobenzene porta alla modifica dei gruppi SH dell'enzima e alla sua inattivazione.<...>Quando i gruppi SH sono stati bloccati dal p-cloromercuribenzoato, è stata osservata una parziale inattivazione della lipasi.<...>La parziale inattivazione dell'enzima in seguito al blocco dei gruppi sulfidrilici indica il loro contributo<...>Il ruolo dei gruppi funzionali proteici negli enzimi // Enzimi. M.: Scienza. 1964, pagine 101–118.

L'inattivazione termica della glucoamilasi è stata studiata utilizzando il metodo spettrofotometrico, metodi digitali di analisi termica differenziale (DTA), ecc. La stabilità termica di questo enzima è stata dimostrata in un ampio intervallo di temperature. È stata confermata la presenza di una struttura quaternaria della glucoamilasi, rappresentata da due subunità

STUDIO DEL PROCESSO DI INATTIVAZIONE TERMICA DELLA GLUCOAMILASI VESTNIK VSU.<...>Collana chimica, biologia, farmacia 2003. N. 1. p. 57 – 60 UDC 577.154.31 RICERCA SUL PROCESSO DI INATTIVAZIONE TERMICA<...>Abbiamo studiato l'inattivazione termica della glucoamilasi a temperature di 50, 60, 70 0C.<...>La velocità di inattivazione dell'enzima in soluzione aumenta rapidamente con l'aumento della temperatura da 500 C a 700 C<...>I dati ottenuti indicano che l'inattivazione termica della glucoamilasi è tipica

INFLUENZA DELLA SOSTITUZIONE DEI RESIDUI Met CON RESIDUI Leu SULLE PROPRIETÀ CATALITICHE, OSSIDATIVE E STABILITÀ TEMPERATURA DEI D-AMINOACIDI OSSIDASI DEL LIEVITO [Risorsa elettronica] / Atroshenko [et al.] // Bollettino dell'Università di Mosca. Serie 2. Chimica.- 2016.- N. 4.- P. 47-57.- Modalità di accesso: https://site/efd/373180

La stabilità ossidativa degli enzimi è determinata principalmente dai residui Cys e Met. Nel caso della D-aminoacido ossidasi (DAAO, EC 1.4.3.3) dal lievito Trigonopsis variabilis (TvDAAO), tre muteine con sostituzioni puntiformi del residuo Met per il residuo Leu sono state ottenute mediante mutagenesi sito-diretta. La scelta delle posizioni per l'introduzione delle sostituzioni è stata effettuata sulla base dell'allineamento multiplo delle sequenze di aminoacidi DAAO provenienti da diverse fonti, nonché sull'analisi della struttura tridimensionale di TvDAAO. Per i mutanti ottenuti sono state studiate le proprietà catalitiche, nonché la stabilità alla temperatura e all'ossidazione. In tutti i casi, la sostituzione ha portato ad un cambiamento nel profilo di specificità del substrato degli enzimi mutanti. C'è un notevole aumento delle costanti di Michaelis per substrati piccoli e una diminuzione di KM per gli amminoacidi D con un radicale laterale voluminoso. È stato dimostrato che come risultato di una delle sostituzioni, la stabilità della temperatura di TvDAAO aumenta di 2-3 volte rispetto all'enzima wild-type. È stato sviluppato un metodo per determinare la stabilità di TvDAAO all'azione del perossido di idrogeno. È stata studiata la stabilità ossidativa dell'enzima wild-type e del risultante mutante TvDAAO. Si è riscontrato che in tutti i casi la sostituzione del residuo Met con un residuo Leu ha avuto un leggero effetto sulla stabilità ossidativa dell'enzima.

L'inattivazione del mutante TvDAAO e dell'enzima wild type in presenza di perossido di idrogeno è stata studiata a 0,05 M<...>due funzioni esponenziali e la velocità di inattivazione dell'enzima dipende dalla sua concentrazione

L'unica rivista mensile scientifica, tecnica e informativo-analitica in Russia e nei paesi della CSI sugli sviluppi scientifici e tecnici in tutti i settori della refrigerazione, attrezzature e tecnologie criogeniche, condizionamento e ventilazione dell'aria, automazione e controllo, trasporto refrigerato, processi e apparecchi di produzione alimentare , sostanze lavorative, problemi ambientali e risparmio energetico. Per più di 100 anni, la rivista è stata la fonte primaria di informazioni sui lavori fondamentali e applicati di eminenti scienziati nazionali e stranieri, nonché una pubblicazione per la pubblicazione dei risultati delle tesi di laurea per i gradi scientifici di candidato e dottore in scienze. La rivista è inclusa nel database internazionale di abstract Agris ed è registrata nel Russian Science Citation Index (RSCI).

Parole chiave: trattamento a microonde, inattivazione di perossidasi e ossidasi, patate fresche tagliate, modalità<...>In questo caso è consigliabile impostare il momento ottimale per il trattamento con campo a microonde in modo che il processo di inattivazione si svolga<...>gli enzimi non hanno portato ad un eccessivo rammollimento del tessuto del prodotto.<...>L'inattivazione della perossidasi sulla superficie e all'interno dei pezzi è avvenuta solo dopo 3 minuti (Fig. 3, D), con<...>Quindi, secondo i risultati degli studi sull'inattivazione di enzimi e microrganismi secondo il regime ottimale

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"IL PROBLEMA DEL "RICONOSCIMENTO": LE AMINOACIL-TRNA SINTETASI E LA LORO INTERAZIONE CON I TRNA" ABSTRACT DIS. ... DOTTORE IN SCIENZE BIOLOGICHE

M.: ORDINE DI LENIN ISTITUTO DI BIOCHIMICA IN NOME ALL'A. N. BACH ACCADEMIA DELLE SCIENZE URSS

PRINCIPALI conclusioni 1 . Il punto di partenza per lo studio sperimentale del problema del riconoscimento è lo sviluppo di basi metodologiche per lo studio delle aminoacil-tRNA sintetasi e del tRNA.

"Tabella Influenza dei substrati sulla velocità di termoinattivazione delle ARSasi dal fegato di ratto, Inattivazione termica<...>Tuttavia, quando sono presenti insieme in condizioni in cui si forma va....liladinile, "l'inattivazione dell'enzima<...>L'aumento dell'"inattivazione osservata in presenza di"!<...>L'effetto del tRNA sull'attività fotochimica delle APCae dal fegato dei ratti. inattivazione in assenza di tRNA<...>: a seconda della natura del substrato e dell'APCase, maggiore inattivazione, effetto protettivo o

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Disposizioni generali L'insufficienza pancreatica esocrina (PIN) si riscontra spesso nella pratica dei medici, sia terapisti che pediatri Classificazione Per origine: primaria (congenita), secondaria (acquisita). Per meccanismo: assoluto e relativo. L'insufficienza pancreatica esocrina primaria (congenita) (EPI) si forma nel periodo prenatale ed è causata da disturbi dell'embriogenesi e/o difetti genetici. L'EPN secondaria (acquisita) è associata a malattie che si sviluppano nel periodo postnatale.

BIOSINTESI E PROPRIETÀ DELLA GLUCOAMILASI ASPERGILUFS AWAMORI ABSTRACT DIS. ...CANDIDATO DI SCIENZE BIOLOGICHE

M.: ORDINE DI LENIN ISTITUTO DI BIOCHIMICA IN NOME ALL'A. N. BACH ACCADEMIA DELLE SCIENZE URSS

CONCLUSIONI 1. Del gran numero di ceppi di funghi studiati, il fungo ASPERGILUFS AWAMORI, con cui è stato effettuato questo lavoro, ha un'elevata capacità di formare glucoamilasi. È stata determinata l'attività degli enzimi amilolitici nella coltura sommersa di fisp. tende di età diverse. Si è scoperto che in un terreno con nitrato di sodio, la formazione di glucoamilasi raggiunge il massimo in una coltura di 5 giorni quando si coltiva il fungo in condizioni di laboratorio, in fiaschi su una sedia a dondolo e in una coltura di 3 giorni quando si coltiva in fermentatori .

Inattivazione della c-amilasi e della glucosiltransferasi Per isolare una preparazione di glucoamilasi altamente purificata<...>Utilizzando la resistenza alla glucoamilasi #sp. awna-t in un ambiente acido e completa inattivazione della *-amilasi a<...>Per la completa inattivazione della glicosiltransferasi, Soley ha richiesto un'esposizione prolungata per almeno 24 ore.<...>È stato sviluppato un metodo per inattivare la glucosiltransferasi e l'α-amilasi nel filtrato di coltura di Aspergillus<...>Transglicosilasi formata nella coltura profonda del fungo Nap/olup e metodi per la sua inattivazione.

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PROTEINASI DEL PANCREAS E LORO INIBITORI (STUDIO DELL'INTERAZIONE DELLE PROTEINASI CON INIBITORI DEL SANGUE. STUDI BIOCHIMICI DEL MECCANISMO DELL'AZIONE ANTINFIAMMATORIA. APPLICAZIONE CLINICA) ESTRATTO DEL DIS. ... DOTTORE IN SCIENZE BIOLOGICHE

ACCADEMIA DELLE SCIENZE DELLA SSR UCRAINA

1. Sulla base dello schema classico per l'isolamento delle proteinasi, sviluppare un metodo per ottenere preparazioni mediche di tripsina cristallina e chimotripsina per iniezioni intramuscolari e fornire loro una valutazione fisico-chimica e farmacologica. 2. In un esperimento sugli animali, studiare l'effetto antinfiammatorio, in particolare antiedematoso, della trypsina ichnmotrnisina quando somministrata per via parenterale, nonché le questioni relative alla delucidazione di alcuni aspetti del meccanismo di questa azione.

È stato stabilito che l'inattivazione della trypsin da parte del siero avviene rapidamente e di solito viene completamente eseguita<...>Come si è scoperto, la tripsina è protetta dall'inattivazione spontanea da parte di un inibitore sierico.<...>Ciò non può essere attribuito all'inattivazione spontanea dell'enzima; probabilmente è trattenuto dai tessuti.<...>L'inibitore II provoca l'inattivazione generale dell'enzima.<...>prevalentemente con l'inibitore II, che predomina quantitativamente sull'inibitore I e provoca un'inattivazione generale

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PROPRIETÀ DELL'AMINOAZIONE RNA SINTETASI PRESENTI NELLE FRAZIONI DI ENZIMI PH5 E. COLI B. ABSTRACT DIS. ...CANDIDATO DI SCIENZE BIOLOGICHE

M.: ISTITUTO DI CHIMICA BIOLOGICA E MEDICA Accademia delle Scienze Mediche dell'URSS

PROPRIETÀ DELLE AMINOACIN-RNA SINTETASI PRESENTI NELLE FRAZIONI DEGLI ENZIMI PH5 DI E. COLI B.

Si è scoperto che il tempo richiesto per l'inattivazione termica degli enzimi attivanti studiati è di 50 £,<...>Il tempo di inattivazione termica per 50 £ di tirosil RNA sintetasi è stato di 30 secondi.<...>che la diminuzione dell'attività nelle regioni acide (rispetto al pH ottimale) è causata da un'inattivazione irreversibile<...>diversa stabilità delle ammineacil-GNA sintetasi quando la preparazione enzimatica viene incubata a 0°. Inattivazione termica da 1".<...>La diminuzione dell'attività quando il pH si sposta verso una regione acida, rispetto al pH ottimale, è causata dall'inattivazione irreversibile

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STUDIO DELLA DIPENDENZA TRA CAMBIAMENTI FISICI E CHIMICI NELLE PROTEINE ENZIMATICHE NATIVE E LA LORO ATTIVITÀ CATALITICA ABSTRACT DIS. ...CANDIDATO DI SCIENZE BIOLOGICHE

ISTITUTO DI BIOCHIMICA, Accademia delle Scienze della SSR Ucraina

Conclusioni 1. La presenza di urea nella miscela di incubazione ad una concentrazione fino a 0,166 M non influenza l'attività dell'aldolasi. Un aumento del suo contenuto provoca una diminuzione dell'attività enzimatica, che dipende direttamente dalla concentrazione di urea. 2. L'attività dell'aldolasi mantenuta in una soluzione di urea 0,5 M per un'ora aumenta del 14,2%...

La domanda sorge spontanea: qui avviene l'inattivazione parziale irreversibile degli enzimi o si verifica solo?<...>urea alla concentrazione di 1 M, riteniamo che in una soluzione acquosa non si verifichi la denaturazione dell'enzima, ma l'inattivazione<...>Si può presumere che questa combinazione di molecole in complessi protegga l'enzima dall'inattivazione irreversibile<...>formazione di aggregati, si verifica l'inattivazione irreversibile della glicerofosfato deidrogenasi, a cui è associata<...>proprietà enzimatiche e fisico-chimiche.

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Fondamenti di chimica e tecnologia per la produzione e la lavorazione dei grassi. Parte 1. Tecnologia per l'ottenimento degli oli vegetali Manuale didattico e metodologico

Università statale di tecnologia chimica di Ivanovo

Il manuale di formazione descrive le operazioni preparatorie per lo stoccaggio e la lavorazione delle materie prime dei semi oleosi, le operazioni tecnologiche per la preparazione dei semi per l'estrazione dell'olio, delinea le basi teoriche e tecnologiche per ottenere oli vegetali mediante spremitura ed estrazione e discute le questioni della purificazione primaria dell'olio estratto . Destinato agli studenti della specialità 260401 Tecnologia dei grassi, degli oli essenziali e dei prodotti di profumeria e cosmetici.

Le condizioni dovrebbero garantire la minima denaturazione delle proteine e l'inattivazione degli enzimi, la disintossicazione dei dolci<...>Contiene l'intero set di enzimi caratteristici di un seme vivente.<...>In questo caso gli enzimi del gruppo fosfolipasi e l'enzima lipasi vengono inattivati.<...>Per neutralizzare le sostanze indesiderate e inattivare gli enzimi che catalizzano i processi di formazione<...>È più difficile ottenere l'inattivazione degli enzimi e di altre sostanze indesiderate contenute nei semi di soia

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STUDI BIOCHIMICI SUI PRODOTTI DELL'AUTOLISI DEL LIEVITO VINO ABSTRACT DIS. ...CANDIDATO DI SCIENZE BIOLOGICHE

M.: ORDINE DI LENIN ISTITUTO DI BIOCHIMICA IN NOME ALL'A. N. BACH ACCADEMIA DELLE SCIENZE URSS

Scopo e obiettivi della ricerca. - studiare i cambiamenti nell'attività enzimatica nel lievito e nel vino durante l'autolisi; - esaminare i prodotti dell'autolisi, le sostanze azotate,

Il successivo invecchiamento provoca una leggera inattivazione dell'enzima.<...>Questi enzimi vengono rilasciati principalmente nel vino.<...>Durante il trattamento termico, insieme al rilascio degli enzimi, si verifica l'inattivazione degli enzimi.<...>processi in fenomeni ikhayug di decomposizione termica di sostanze chimiche, denaturazione termica di proteine, inattivazione<...>Durante il trattamento termico, insieme al passaggio delle sostanze dal lievito al vino, si osserva l'inattivazione degli enzimi

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Il lavoro è dedicato allo studio del reagente ATP, che contiene la luciferasi termostabile mutante delle lucciole Luciola mingrelica, luciferina, MgS0_4, componenti di una soluzione tampone e stabilizzanti ed è ampiamente utilizzato per determinare concentrazioni nano- e picomolari di adenosina-5"- fosfato (ATP) in vari campioni biologici Valutazione condotta dell'attività, stabilità e caratteristiche analitiche del reagente ATP in soluzione in presenza e assenza di gelatina al 5% e in gel di gelatina Ad una concentrazione di gelatina del 5% e ad una temperatura > = 30°, è stata ottenuta una soluzione di reagente ATP e al di sotto di 30° si verifica la gelificazione. Le soluzioni del reagente ATP sono state studiate a 30° e le pellicole sottili di gelatina con il reagente ATP sono state studiate a 22°. Le aggiunte di gelatina riducono leggermente l'attività e stabilità della luciferasi. La sensibilità della determinazione dell'ATP (superiore a 0,96) non dipendeva dalla presenza di gelatina e dallo stato aggregativo dei sistemi dispersi. I limiti di rilevamento erano 2 * 10 (-12), 7 * 10 (-13), 7 * 10(-14) M ATP quando si utilizza il reagente ATP in pellicole di gelatina e in soluzione in presenza di gelatina al 5% e rispettivamente in sua assenza. È stato dimostrato che la conservazione del reagente ATP a 22°C in un gel di gelatina non solo preserva l'attività enzimatica, ma protegge anche l'enzima dalla contaminazione batterica, con conseguente perdita dell'attività luciferasica.

Durante questo periodo, l'inattivazione del reagente ATP nel tampone è stata solo dell'8%.<...>Le curve di inattivazione cinetica mostrano (Fig. 2) che in tutti i casi il processo procede secondo il primo<...>Successivamente, l'inattivazione procede nel primo ordine.<...>L'inattivazione dell'enzima a 4° avveniva nel primo ordine e non dipendeva dal fatto che l'enzima fosse in un tampone<...>Berezin I.V., Klyachko N.L., Levashov A.V. e altri // Enzimi immobilizzati. M., 1987.

N. 1 [Industria alimentare e di trasformazione. Rivista astratta, 2002]

Nel 1999 è stato pubblicato il primo numero della rivista astratta “Food and Processing Industry”. Dal 2000, la Biblioteca Centrale della Ricerca Scientifica viene pubblicata con cadenza trimestrale. La rivista è un organo di informazione attuale sulla letteratura nazionale ed estera relativa all'industria alimentare. La pubblicazione è destinata a scienziati, specialisti e professionisti del settore alimentare e può fungere da strumento di riferimento per bibliotecari e operatori di organismi di informazione scientifica e tecnica. Il volume annuo di RJ è di circa 1200 pubblicazioni. La pubblicazione include informazioni sugli articoli più significativi provenienti da riviste e raccolte scientifiche e scientifico-pratiche ricevute dalla Biblioteca Centrale della Ricerca Scientifica e riflette il flusso documentario globale in tutti i settori dell'industria alimentare.

C, l'enzima è stabile tra 4 e 30°C, poi la stabilità diminuisce, e dopo i 60°C si verifica una rapida inattivazione<...>all’inattivazione incompleta del PPO.<...>È stato notato che 1 e 2 non causano l'inattivazione enzimatica, 3 minimamente e 4a e 4b inattivano selettivamente<...>rapida inattivazione del PPO.<...>È stato osservato che 1 e 2 non causano inattivazione enzimatica, 3 in misura minima e 4a e 4b in modo selettivo

Basi biotecnologiche per l'utilizzo di preparati microbiologici di sintesi per la lavorazione di carne cruda con ridotte proprietà funzionali e tecnologiche monografia

Il lavoro riassume i risultati di molti anni di ricerca e sistematizza le informazioni che caratterizzano le prospettive e le potenziali possibilità di utilizzare complessi preparati di enzimi proteolitici per correggere le proprietà delle materie prime a base di carne di bassa qualità, nonché per la carne che presenta deviazioni nella natura del corso delle trasformazioni autolitiche. La monografia è stata preparata presso il Dipartimento di tecnologia della produzione alimentare dell'Università tecnologica statale di Kazan.

al substrato e, dall'altro, il risultato dell'inattivazione enzimatica.<...>nell'industria alimentare è possibile solo se è completamente inattivato nel prodotto finito, perché<...>Come si può vedere dai risultati ottenuti (Fig. 2.4), l'inattivazione dell'enzima inizia a pH 8,0 e intensamente<...>Un ulteriore aumento della temperatura di incubazione a 600°C ha portato al completamento

Lo scopo di questo studio era studiare l'influenza del materiale vegetale introdotto nel suolo della foresta grigia e le condizioni della sua umidità sull'attività degli enzimi redox.

suolo La sterilizzazione dei campioni di terreno con materiale organico introdotto mediante radiazioni ha portato alla completa inattivazione<...>nei campioni di terreno e per completare l'inattivazione del preparato enzimatico nella sabbia di quarzo.<...>Una significativa inattivazione dell'enzima si è verificata nella sabbia di quarzo.<...>La sterilizzazione del suolo mediante radiazioni γ e alta temperatura porta alla completa inattivazione delle dsidrogenasi,<...>È stato dimostrato che l'inattivazione dei preparati degli enzimi catalasi e perossidasi introdotti nel suolo della foresta grigia

Pertanto, lo scopo della sbollentatura è quello di inattivare gli enzimi indesiderati presenti nelle verdure,<...>Copyright OJSC "CDB "BIBKOM" & LLC "Agenzia Kniga-Service" 61 N. 10/2015 tra temperatura e tempo di inattivazione<...>dalla sua forma, dimensione, struttura, grado di maturità e soprattutto dal tipo di sistemi enzimatici sottoposti ad inattivazione<...>a basse temperature viene talvolta utilizzato per migliorare la consistenza del prodotto attraverso l'inattivazione selettiva<...>La perossidasi è uno degli enzimi più termostabili.

SEMI DI ARGINASE VIKI SHORNOY ABSTRACT DIS. ...CANDIDATO DI SCIENZE BIOLOGICHE

M.: ISTITUTO PEDAGOGICO STATALE DI MOSCA intitolato a V. I. LENIN

Conclusioni 1. L'idrolisi dell'arginina in presenza di preparati di arginasi da semi di veccia solo nelle fasi iniziali di incubazione obbedisce alle condizioni di un processo monomolecolare. Man mano che la reazione procede, i tassi empirici restano indietro rispetto a quelli calcolati per la condizione di reazione del primo ordine.

per calcolare le costanti di inibizione enzimatica da parte del prodotto di reazione (orntina).<...>substrati e prodotti di reazione; 2) inattivazione termica dell'enzima durante la reazione.<...>L'intero insieme di punti definisce una curva e quindi possiamo supporre che l'inattivazione termica sia l'enzima<...>Poiché è stato dimostrato che durante la reazione non avviene l'inattivazione termica dei farmaci, è opportuno presumerlo<...>Inattivazione dell'arginasi vegetale durante l'idrolisi enzimatica dell'arginina.

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I radicali liberi, che comprendono i metaboliti dell'ossigeno attivato e l'ossido nitrico, se prodotti in eccesso, possono svolgere un ruolo significativo nell'insorgenza di condizioni patologiche del sistema riproduttivo: endometriosi, mastopatia diffusa, induzione di carcinogenesi di varie localizzazioni. Esistono prove a sostegno del ruolo dello stress ossidativo nell’infertilità femminile. I risultati degli studi preclinici e clinici confermano la fattibilità dell’uso degli antiossidanti per la prevenzione e il trattamento di queste malattie. Le vitamine A, C, E, per la loro disponibilità, prevalenza in natura, migliore studio e affinità per il corpo umano, sono spesso incluse nella terapia complessa. Esiste una base di prove significativa per l'efficacia dell'uso di vitamine antiossidanti per il trattamento delle malattie del sistema riproduttivo. La maggiore efficacia della farmacoterapia complessa con l'uso di antiossidanti è spiegata non solo dall'effetto sulla perossidazione lipidica come uno dei collegamenti nella patogenesi della malattia, ma anche da un cambiamento nell'intensità del metabolismo dei farmaci prescritti contemporaneamente agli antiossidanti a causa alla riduzione del citocromo P450 3A4. L'analisi elettrochimica dell'attività catalitica del citocromo P450 3A4 ha mostrato che le vitamine A, C ed E influenzano la riduzione del citocromo P450 3A4 a causa del loro effetto antiossidante.

Questi processi sono controllati da enzimi, eliminando la fuoriuscita di prodotti reattivi.<...>comporta una violazione delle sue funzioni regolatrici in relazione ai processi più importanti del metabolismo cellulare: l'inattivazione<...>I ROS possono interagire con il citocromo P450, causando l'inattivazione dell'enzima.<...>Le vitamine C, E e beta-carotene forniscono all'organismo AOD non enzimatico grazie all'inattivazione a diversi livelli<...>Il beta-carotene, insieme all'inattivazione delle specie reattive dell'ossigeno a diversi livelli, è in grado di ripristinare

REGOLAMENTO E PROPRIETÀ DEL SISTEMA VITROGENASI RODOBACTER CAPSULATUS ABSTRACT DIS. ...CANDIDATO DI SCIENZE BIOLOGICHE

M.: ISTITUTO DI MICROBIOLOGIA DELL'ACCADEMIA DELLE SCIENZE DELL'URSS

Lo scopo di questo lavoro era studiare le proprietà nella regolazione del sistema nitrohecase del batterio viola non solforato Rhodobaoter сapaulatua ceppo BIO

Di conseguenza, la transizione della nitrogevasi di questo batterio a NGr-foro è un'inattivazione dell'enzima in quanto tale<...>Un ruolo essenziale è l'inattivazione della nitratosi; e il Pd I di R.capaula “inattivazione di questo enzima / poiché mantiene l'attività. in vivo e inviSiw quando utilizzato<...>La nitrato reduttasi di B. capeulatua è un enzima di tipo diosimilatorio. 8.<...>Un ruolo significativo nell'inattivazione delle molecole di necrogenasi e ferredossina I: lo giocano i prodotti

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Il contenuto di eparina libera nel plasma sanguigno di pazienti con policitemia vera e la frequenza dei sintomi cerebrali neurologici [risorsa elettronica] / Gaidukova, Tkachenko, Bublii // Ematologia. Trasfusiologia. Europa dell'Est.- 2016.- N. 1.- P. 47-57.- Modalità di accesso: https://site/efd/478925

Rilevanza. La policitemia vera (PV) è una malattia del gruppo delle neoplasie mieloproliferative, le cui manifestazioni cliniche sono caratterizzate da una tendenza al sanguinamento e alla trombosi. Scopo: studiare il contenuto di eparina libera nel plasma sanguigno dei pazienti con PV e determinare la struttura dei sintomi cerebrali in questa malattia. Materiali e metodi. Sono stati esaminati 32 pazienti con IP. Tra i pazienti esaminati, 18 erano uomini e 14 donne. L'età media dei pazienti esaminati era di 57,2±1,2 anni. Il secondo gruppo di osservazione era composto da 52 pazienti esaminati per sospette malattie mieloproliferative del sangue, ma dopo un approfondito esame clinico ed ematologico tali malattie sono state escluse da essi e la condizione del sangue periferico è stata considerata come SE assoluta, a causa della presenza di alcuni malattie somatiche. Tra i pazienti esaminati c'erano 30 uomini e 22 donne. L’età media dei pazienti nel gruppo 2 era di 55,7±3,6 anni. Il gruppo di controllo era composto da 35 individui praticamente sani di età simile. La determinazione quantitativa del contenuto della frazione libera di eparina è stata effettuata mediante analisi elettroforetica secondo il metodo di B.V. Mikhailichenko, S.V. Vydybortsa (2000). Risultati e conclusioni. Nei pazienti con IP c'è uno squilibrio nel metabolismo dell'eparina libera, che si manifesta con un aumento del suo contenuto nel plasma sanguigno. La discussione presenta dati sul ruolo fisiologico dell'eparina. È stato dimostrato che la sua azione consiste non solo nella regolazione dell'emostasi, ma anche nel controllo dell'angiogenesi, delle reazioni immunitarie, nella regolazione del metabolismo dei grassi e dei carboidrati, nell'attività antibatterica, antivirale e antinfiammatoria. Vengono discussi i possibili meccanismi di accadimento delle violazioni individuate.

Innanzitutto il lavoro esamina le seguenti domande: 1. Le proprietà della RNA polimerasi cambiano quando viene combinata con il DNA ancor prima che inizi la sintesi dell'RNA? 2. Qual è la stabilizzazione della polimerasi in presenza di DNA e NTP associata a: l'atto di iniziazione, cioè connessione dei primi NTP, con il processo di sintesi di lunghe catene di polinucleotidi o con l'effetto stabilizzante degli NTP sulla RNA polimerasi, non associati alla connessione dei nucleotidi tra loro. 3. È importante per la stabilizzazione della polimerasi durante la sintesi dell'RNA preservare la dimensione e la struttura nativa a doppio filamento del DNA modello?

Condizioni di incubazione g I enzima libero; 2 enzima + DNA) 3 enzima + DNA + NTP.<...>Tabella 7 Inattivazione della trypsin RNA polimerasi in base alle condizioni della sua preincubazione Durante la preincubazione<...>Questo risultato, così come i dati su inattivazione

Il lavoro ha studiato l'effetto delle alte temperature dannose (45°C) per due e dodici ore sulle piante di G. max e G. soja modificando gli spettri elettroforetici di perossidasi e catalasi. I cambiamenti quantitativi e qualitativi negli spettri elettroforetici delle foglie causati dallo stress termico dipendevano dal genotipo, dalla fase di sviluppo della soia e dalla durata del fattore di stress. È stato dimostrato che lo stress termico a breve termine non porta a cambiamenti quantitativi negli spettri elettroforetici della perossidasi e della catalasi nelle foglie di soia. L'esposizione prolungata a temperature elevate e dannose provoca l'inattivazione principalmente di forme di perossidasi e catalasi con mobilità elettroforetica media. Forme stabili di perossidasi con Rf 0,02; 0,10; 0,21 (G.max) e Rf 0,02; 0,10; 0,40 (G. soja), catalasi con Rf 0...0,04 (G. max) e Rf 0...0,04; 0,22…0,24 (G. soja), nonché le forme sedentarie attivate ad alte temperature, assicurano il funzionamento delle piante in condizioni di stress

L'esposizione prolungata a temperature elevate e dannose provoca l'inattivazione principalmente di forme di perossidasi<...>L'esposizione prolungata allo shock termico provoca l'inattivazione degli enzimi.<...>Molteplici forme molecolari di enzimi svolgono un ruolo importante nei meccanismi di adattamento termico della soia.<...>L'esposizione a temperature elevate e dannose per dodici ore provoca principalmente l'inattivazione<...>Il ruolo degli enzimi nella resistenza delle piante / K.N. Sarsenbaev, F.A. Polimbetova // Accademia delle Scienze del KazSSR, Capo Bot. giardino.

I metodi di rilassamento si basano sul principio che con una rapida influenza esterna su un sistema (cambiamento di temperatura, pressione, ecc.), il tempo necessario al sistema per raggiungere un nuovo equilibrio (o stato stazionario) dipende dalla velocità delle sostanze chimiche reazione (e talvolta sulla velocità di diffusione dei reagenti.

Consideriamo la reazione più semplice di complessazione del centro attivo di un enzima con un ligando

All'inizio il sistema è in equilibrio, caratterizzato dalla costante di equilibrio K 0 =K(T 0) e, di conseguenza, le concentrazioni di equilibrio ,,
. Supponiamo che la temperatura nel sistema cambi bruscamente T->T 0 +T. Ciò porta ad una variazione della costante di equilibrio K->K 0 +K, che è determinato dalla relazione

(2.50)

dove  H– variazione di entalpia standard. Successivamente il sistema passa ad un nuovo stato di equilibrio:

(2.51)

(2.52)

L'equazione (2.51) non è lineare. Supponiamo che la deviazione dall'equilibrio sia piccola e quindi

e l'equazione (2.51) viene trasformata in un'equazione differenziale lineare:

La soluzione di questa equazione differenziale è:

Grandezza

(2.54)

chiamato momento di relax.

2.5. L'influenza della temperatura e del pH sulla velocità delle reazioni enzimatiche

L'influenza di questi fattori sulla velocità di una reazione chimica elementare è stata discussa nel Capitolo 1. La particolarità è che le reazioni enzimatiche sono reazioni complesse a più stadi (costituite da molte reazioni elementari). Inoltre, lo stato delle molecole enzimatiche in soluzione è caratterizzato da un insieme di conformeri che si trasformano reversibilmente l'uno nell'altro. Le transizioni conformazionali della molecola sono determinate in larga misura dalla temperatura e dal pH della soluzione.

2.6. Inibizione delle reazioni enzimatiche

Vengono chiamate sostanze che inibiscono l'attività catalitica degli enzimi inibitori . Esistono due classi principali di inibitori: reversibile

(2.55)

(pesticidi, sarin, soman, aspirina, ecc.)

E irreversibile (inattivatori )

(2.55)

(monossido di carbonio, ione cianuro, analgin, ecc.)

2.7. Inattivazione enzimatica

Le molecole di biopolimeri (enzimi) sono termodinamicamente instabili e, di norma, cambiano la loro struttura e proprietà nel tempo. Nella maggior parte dei casi, il processo di inattivazione può essere descritto come una transizione tra due stati dell'enzima attivo. E UN e inattivo E io :

(2.56) La cinetica del processo è descritta dalla corrispondente equazione differenziale

(2.57)

ed è caratterizzato da una costante di tempo

(2.58)

Il processo di inattivazione enzimatica può avere una natura fisico-chimica diversa. La più comune è la denaturazione termica, che è una significativa ristrutturazione della macromolecola, un cambiamento nella struttura terziaria e parzialmente secondaria.

Per scopi di inattivazione è possibile utilizzare ultrasuoni di cavitazione, radiazioni radioattive, ecc.

Un cambiamento nel pH può anche portare alla denaturazione dell'enzima. Ad ogni valore di pH la proteina è caratterizzata da una corrispondente distribuzione di carica (gruppi ionogeni). A pH molto basso o molto alto, la distribuzione della carica può polarizzare notevolmente la molecola, portare alla comparsa di isomeri e conformarla irreversibilmente con la distruzione della struttura del centro attivo. Per esempio:

La denaturazione degli enzimi è causata da agenti denaturanti, distruggendo la struttura secondaria delle proteine (ad esempio l'urea), nonché i processi ossidativi che coinvolgono l'ossigeno.

Quando si studiano tali processi, informazioni importanti si ottengono con metodi di rilassamento. Di norma, i cambiamenti conformazionali sono accompagnati da cambiamenti nell'ambiente degli aminoacidi aromatici - tirosina e triptofano (banda di assorbimento delle radiazioni a 290 nm). Ciò si manifesta in cambiamenti negli spettri di assorbimento e fluorescenza.

I cambiamenti conformazionali reversibili di solito si verificano in un tempo compreso tra 0,1 e 100 ms e quelli irreversibili - 1-1000 minuti.

Esempio 1. Lo schema cinetico più semplice di inattivazione con equilibrio conformero:

(2.59)

La cinetica del processo è descritta da un tempo caratteristico

(2.60)

Esempio 2. Entrambi i conformeri sono soggetti a inattivazione:

(2.61)

(2.62)

Esempio 3. Un caso più generale per un sistema che coinvolge N conformeri:

Gli enzimi spesso formano dimeri in soluzione e sono più stabili nella forma dimerica. Poi si osserva meccanismo dissociativo di inattivazione :

(2.65)

Lo schema seguente riflette i possibili meccanismi di inattivazione durante la reazione (inattivazione monomolecolare della forma libera dell'enzima, inattivazione monomolecolare del complesso enzima-substrato, inattivazione bimolecolare dell'enzima da parte del substrato, inattivazione bimolecolare dell'enzima da parte del prodotto) :

(2.66)

La discriminazione dei meccanismi di inattivazione e la determinazione delle caratteristiche cinetiche della reazione vengono solitamente effettuate con diversi metodi:

analizzare la dipendenza della resa del prodotto dalla concentrazione dell'enzima;

stabilire una relazione tra il grado di conversione del substrato e il grado di inattivazione enzimatica;

effettuare la reazione a bassi gradi di conversione del substrato e basse concentrazioni di enzima;

effettuare la reazione ad alte concentrazioni dell'enzima;

preincubazione dell'enzima con componenti di reazione;

uso delle equazioni integrali di reazione.

Haugaard nel 1946 dimostrò che gli enzimi la cui attività dipende dalla presenza di forme ridotte di gruppi sulfidrilici sono insolitamente sensibili agli effetti tossici dell'ossigeno. Nel 1972, Tjioe e Haugaard giunsero alla conclusione che l'inattivazione di tali enzimi sotto l'azione dell'O2 ad una pressione assoluta di 5 kgf/cm2 è correlata alla scomparsa dei gruppi sulfidrilici attivi.

Nei polmoni ratti sotto l'influenza dell'iperossia (PiO2 = 5 kgf/cm2), l'attività dell'idrogenasi e il contenuto dei gruppi sulfidrilici erano significativamente ridotti dopo 15-30 minuti di esposizione e non erano macroscopici, ma nei tessuti si notavano solo piccoli cambiamenti microscopici. Dopo 45 minuti di esposizione sono stati osservati danni ai polmoni e un aumento dei livelli di bisolfuro.

Tranne enzimi contenenti gruppi sulfidrilici attivi, è noto che molti altri enzimi vengono inattivati sotto l'influenza dell'iperossia. È anche possibile che i radicali potenzialmente reattivi possano causare danni irreversibili alle catene peptidiche e soprattutto agli aminoacidi.

Perossidazione lenta

Interazione insaturo i lipidi con un anione perossidato o con altri radicali liberi possono prima portare al rilascio di un radicale lipidico e quindi, come risultato dell'autossidazione in presenza di ossigeno, formare un radicale perossido lipidico. Un'ulteriore interazione del perossido lipidico con altri lipidi può rigenerare ciclicamente i radicali liberi dei lipidi e i composti del perossido, provocando così una reazione a catena e una progressiva perossidazione lipidica.

Kovacich, Mishra(1980) hanno dimostrato che la perossidazione lipidica in fettine di cervello di ratto appare anche durante l'esposizione alla normale pressione atmosferica con accumulo di composti di perossido nel mezzo, così come nel fluido intracellulare. Sebbene la perossidazione lipidica indotta dall'ossigeno non sia stata ancora chiaramente dimostrata in vivo, in letteratura vi sono rapporti secondo cui potrebbe verificarsi nel tessuto cerebrale, nei globuli rossi, nella vescica della rana e nel polmone isolato del ratto.

IN letteratura Esistono molti rapporti secondo cui i sistemi di trasporto attivo legati alla membrana tendono ad essere inattivati dall'ossigeno. È noto che il consumo di sali dell'acido glutammico dipende dal sistema di trasporto associato al trasferimento del potassio. Nel 1957, Kaplan e Stein, utilizzando sezioni della corteccia cerebrale di cavie esposte all'ossigeno sotto una pressione assoluta di 6 kgf/cm2 per 90 minuti, scoprirono sia un'interruzione nei processi di consumo tissutale dei sali di acido glutammico sia l'accumulo di sali di acido glutammico. potassio.

Simile modelli furono stabiliti nel 1970 da Joanny e collaboratori su sezioni corticali del cervello esposte all'ossigeno sotto una pressione assoluta compresa tra 1 e 10 kgf/cm2. Da segnalazioni bibliografiche sappiamo anche di danni al trasporto attivo del sodio in un preparato di vescica di rospo e in un lembo cutaneo isolato di rana sotto l'influenza di iperossia. Nel 1973, Allen e colleghi conclusero che il meccanismo più probabile per l'inattivazione del trasporto del sodio da parte dell'ossigeno era la formazione di intermedi di perossido lipidico.

Per violazione sodio pompa di membrana cellulare in sezioni corticali prelevate da ratti esposti a iperossia ad una pressione assoluta di 4 kgf/cm2 indica il fenomeno osservato di inattivazione della Na-K-ATPasi.

Assimilazione come serotonina, quindi l'adrenalina in un preparato polmonare perfuso isolato prelevato da ratti esposti all'ossigeno ad una pressione assoluta di 1 kgf/cm2 diminuisce. Entrambi questi cambiamenti erano significativi entro 12-24 ore dall’esposizione, cioè molto prima della comparsa del danno strutturale o della comparsa dei sintomi clinici della tossicità polmonare dell’ossigeno.

Al contrario, altezza da terra imipramina non è cambiato nei polmoni isolati di ratti che hanno respirato ossigeno puro a pressione atmosferica normale per circa 48 ore. I risultati ottenuti sono coerenti con la possibilità di un trasporto attivo di serotonina e norepinefrina nelle cellule endoteliali dei capillari polmonari, mentre la rimozione dell'imipramina avviene attraverso il legame passivo. Inoltre, gli autori citati hanno scoperto che l'effetto tossico dell'ossigeno sulla membrana delle cellule endoteliali si estende a più di un trasportatore o ad alcuni dei principali componenti coinvolti nel trasporto di entrambe le ammine.

L'idrolisi enzimatica dell'amido avviene sotto l'influenza degli enzimi amilasi, che sono contenuti nella saliva, nel succo pancreatico, nel sangue, nel fegato e nel cervello. Le fonti di amilasi nell'industria sono i chicchi di cereali germogliati (malto) e le colture di muffe.

Sono note le A e le amilasi, che differiscono alquanto nella natura della loro azione. Sotto l'influenza dell'a-amilasi, il processo di scissione idrolitica dell'amido viene ritardato principalmente allo stadio delle destrine e si forma poco maltosio, mentre sotto l'influenza della P-amilasi, la scissione procede prevalentemente

formazione di maltosio. Questo processo può essere presentato in sequenza come segue.

Il maltosio, sotto l'azione dell'enzima maltasi (a-glucosidasi), si scompone in due molecole di a-D-glucosio. C'è anche l'enzima glucoamilasi, che catalizza la scomposizione dell'amido in glucosio.

Il progresso della degradazione idrolitica dell'amido può essere tracciato utilizzando le reazioni di Trommer, Benedict o Nylander (vedi Sezione VII), che caratterizzano le proprietà riducenti dei carboidrati.

Durante l'idrolisi enzimatica dell'amido, aumenta la quantità di idrossili glicosidici liberi, che determinano proprietà riducenti, e quindi maltosio e glucosio sono in grado di ridurre l'ossido di rame a protossido di azoto, l'ossido di bismuto idrato o l'ossido d'argento a metalli.

Reattivi: a) saliva. La saliva fresca viene diluita 10 volte con acqua distillata: b) amido, soluzione; c) una soluzione di iodio in ioduro di potassio (soluzione di Lugol): 1 g di ioduro di potassio viene sciolto in pochi millilitri di acqua, 1 g di iodio viene sciolto in una soluzione salina concentrata e addizionato con acqua fino a 300 ml; d) soda caustica, soluzione al 5%; e) soluzione di solfato di rame.

Una soluzione di amido viene versata in due provette, a una di esse viene aggiunto 1 ml di saliva diluita (1: 10), all'altra viene aggiunto 1 ml di acqua e lasciato per 10 minuti.

in un bagnomaria riscaldato a 37-38° (controllare attentamente la temperatura, evitando che salga), o, meglio ancora, in un ultratermostato, dopodiché le provette vengono raffreddate sotto il rubinetto. Le reazioni di Trommer vengono eseguite anche con lo iodio, per cui il contenuto di ciascuna provetta viene diviso a metà.

Inattivazione degli enzimi mediante alta temperatura.

Essendo sostanze proteiche, gli enzimi sono molto sensibili alla temperatura alla quale avviene la reazione. La temperatura ottimale per l'azione degli enzimi negli animali a sangue caldo è 37-38 ° C. Con un leggero aumento della temperatura (ad esempio 40-45 ° C), la velocità delle reazioni enzimatiche aumenta inizialmente, ma con ulteriore riscaldamento ( sopra i 50°C) cade, e a 70-80° si perde. L'ebollizione comporta la perdita completa dell'attività catalitica degli enzimi a causa della denaturazione della loro parte proteica (apoenzimi). A temperature inferiori allo zero, la velocità delle reazioni enzimatiche diminuisce in modo significativo, ma gli enzimi stessi non vengono distrutti e, con un attento scongelamento, ripristinano la loro attività.

Reattivi: a) saliva, diluita 5 volte con acqua distillata; b) amido, soluzione all'1%; c) una soluzione di iodio in ioduro di potassio (vedi lavoro precedente); d) reagenti per la reazione di Trommer (vedi lavoro precedente).

1 ml di saliva diluita viene versato in due provette. Il contenuto di uno di essi viene riscaldato a ebollizione e fatto bollire per 2-3 minuti. Quindi aggiungere 1 ml di soluzione di amido in entrambe le provette e lasciare agire per 10 minuti. a bagnomaria riscaldato a 38 ° C, dopo di che vengono eseguite le reazioni di Trommer con iodio. Assicurarsi che nella provetta in cui l'enzima è stato inattivato mediante bollitura non si sia verificata la disgregazione dell'amido.

Specificità dell'azione enzimatica.

Questa è una delle proprietà più importanti degli enzimi. Ciascun enzima agisce solo su una sostanza specifica o su un gruppo di sostanze simili nella struttura. Si distinguono i seguenti tipi di specificità: a) assoluta, quando gli enzimi catalizzano una sola reazione di trasformazione di qualsiasi sostanza. Ad esempio, l'ureasi (urea - amidoidrolasi) catalizza solo la reazione di scissione idrolitica dell'urea in ammoniaca e biossido

carbonio; b) gruppo, quando un enzima catalizza le reazioni di trasformazione di sostanze simili nella struttura e costruite secondo lo stesso tipo. Pertanto, la saccarasi (P-fruttofuranosidasi) catalizza la reazione di scissione idrolitica del saccarosio con rilascio di molecole di glucosio e fruttosio, ma lo stesso enzima catalizza anche la reazione di idrolisi parziale del trisaccaride di raffinosio (a-galattoside-a-glucoside-p- fruttoside), in cui viene rilasciata solo una molecola di fruttosio, e il legame tra galattosio e glucosio rimane intatto; c) stereochimico, che si manifesta nel fatto che l'enzima catalizza la reazione di scissione o sintesi di uno solo degli stereoisomeri, senza influenzare l'altro. L'ossidazione dell'acido L-lattico in acido piruvico è catalizzata dall'enzima lattato deidrogenasi, mentre lo stesso processo dell'acido D-lattico è catalizzato da un altro enzima, la lattato deidrogenasi.

Reattivi: a) saliva, diluita 10 volte con acqua distillata; b) saccarosio, soluzione all'1%; c) amido, soluzione all'1%; d) reagenti per la reazione di Trommer.

1 ml di saliva diluita viene versato in due provette, quindi in una di esse viene aggiunto 1 ml di soluzione di saccarosio e nell'altra viene aggiunta la stessa quantità di soluzione di amido. Entrambe le provette vengono riscaldate per 10 minuti. a bagnomaria alla temperatura di 38°C, dopodiché vengono raffreddati e viene effettuata la reazione di Trommer con il contenuto di ciascuno di essi. Sono convinti che l'amilasi abbia catalizzato solo il processo di degradazione idrolitica dell'amido e non abbia avuto alcun effetto sul saccarosio.

Effetto del pH ambientale sull'attività dell'amilasi salivare.

Ogni enzima mostra il suo massimo effetto catalitico ad un pH ambientale rigorosamente definito. Molti enzimi mostrano la loro massima attività nel punto isoelettrico.

Il valore di pH ottimale per la pepsina è 1,5-2,0, l'amilasi salivare -6,8-7,0, la trypsin - 7,8, la lipasi pancreatica - 7,0-7,8. È stato tuttavia dimostrato che gli enzimi che catalizzano le stesse reazioni, ma isolati da substrati diversi, mostrano un'azione ottimale a diversi valori di pH. Pertanto, si osserva l'azione ottimale della sucrasi intestinale

a pH 6,2 e saccarasi isolata dal lievito - a pH 4,6-5,0. Il pH ottimale dell'amilasi salivare è 6,8-7,0 e l'amilasi del malto mostra la massima attività catalitica a pH 4,4-4,5.

Reattivi: a) saliva, diluita 100 volte con acqua distillata; b) amido, soluzione allo 0,5%; c) acido citrico, soluzione 0,1 M (19,212 g di acido in 1 litro); d) soluzione di fosfato di sodio M disostituito (contiene 36,62 g di sale in 1 litro); e) Soluzione di Lugol (una soluzione di iodio in ioduro di potassio); e) cloruro di sodio, soluzione all'1%.

Le soluzioni di acido citrico e fosfato di sodio vengono versate in 7 provette dello stesso tipo utilizzando pipette nelle quantità indicate in tabella. 4, ottenendo così miscele tampone con valori di pH da 5,6 a 8,0. Aggiungere 10 gocce di una soluzione di cloruro di sodio all'1%, una soluzione di amido allo 0,5% e la saliva diluita 100 volte in ciascuna provetta e mescolare.

Tavolo 4. Miscele tampone fosfato-citrato

Le provette vengono lasciate per 10 minuti. a bagnomaria alla temperatura di 38°C, quindi raffreddare velocemente, aggiungere 1 goccia della soluzione di Lugol in tutte le provette, mescolare ed osservare il colore. Determinare a quale pH si è verificata la degradazione più completa dell'amido (colore giallo o giallo-brunastro con iodio). La reazione è molto specifica e rivelatrice.